幾丁糖對(duì)擴(kuò)張后皮瓣纖維包膜影響的臨床應(yīng)用與研究.pdf

1、目的：本課題旨在探討幾丁糖對(duì)擴(kuò)張后皮瓣纖維包膜厚度、毛細(xì)血管數(shù)量、成纖維細(xì)胞向成肌纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化以及膠原纖維的合成與分泌所產(chǎn)生的影響，進(jìn)一步揭示幾丁糖干預(yù)纖維包膜形成的作用機(jī)理，為臨床防治皮膚軟組織擴(kuò)張術(shù)中因纖維包膜攣縮而導(dǎo)致擴(kuò)張后皮瓣攣縮，提高手術(shù)療效探索一條新途徑。 方法: 1.臨床資料：2006年以來(lái)，每個(gè)患者同時(shí)應(yīng)用二個(gè)擴(kuò)張器修復(fù)病變，共對(duì)24例患者行皮膚軟組織擴(kuò)張術(shù)，男女各12人，年齡22歲至33歲，平均27歲。

2、其中色素痣13例，瘢痕11例，切除病變后皮膚軟組織范圍約在30-35c m2。 2分組 每個(gè)患者均在病變周圍兩側(cè)正常皮膚，皮下淺筋膜深層各剝離足夠大腔隙，各埋植100ml皮膚軟組織擴(kuò)張器一枚；將其中一側(cè)設(shè)為治療組，另一側(cè)設(shè)為對(duì)照組。 3擴(kuò)張器植入及注水方法治療組在腔隙剝離完成后，徹底止血，觀察無(wú)活動(dòng)性出血，將2％醫(yī)用幾丁糖2ml注入腔隙內(nèi)，使其涂布均勻，再植入100ml皮膚軟組織擴(kuò)張器一枚；對(duì)照組常規(guī)植入100m

3、l皮膚軟組織擴(kuò)張器一枚，不做其他處理。待術(shù)后第三天開(kāi)始注水?dāng)U張，視情況隔兩日注水?dāng)U張一次，每次注水量視皮瓣張力大小而定，以皮瓣指壓反應(yīng)4-5秒為限；同一患者的實(shí)驗(yàn)側(cè)與對(duì)照側(cè)每次注水量相同。每只100ml皮膚軟組織擴(kuò)張器注水達(dá)到150ml后停止注水。 4取材完成擴(kuò)張后三周即行二期手術(shù)，麻醉成功后，沿原切口取出擴(kuò)張器，然后均在兩個(gè)擴(kuò)張器中心部位剝?nèi)? c m×3 cm大小纖維包膜，平鋪于無(wú)菌紗布上，四角固定，以4％中性戊二醛，制作石蠟切片，

4、分別作常規(guī)HE染色、Masson染色和CD34染色。雙側(cè)在同樣部再剝?nèi)?.1cm×0.1cm×0.3cm大小纖維包膜標(biāo)本，以中性甲醛固定，送透射電鏡觀察。 5觀測(cè)指標(biāo) (1)光鏡下觀察HE染色切片的組織學(xué)變化，并應(yīng)用顯微標(biāo)尺測(cè)量標(biāo)本纖維包膜厚度；光鏡下觀察Masson染色切片，比較治療組和對(duì)照組標(biāo)本中膠原纖維的含量變化，并應(yīng)用病理圖像分析系統(tǒng)對(duì)染色標(biāo)本進(jìn)行平均灰度的定量分析。光鏡下觀察CD34染色切片，比較治療組和對(duì)照組

5、纖維包膜中毛細(xì)血管數(shù)量的變化。(2)透射電鏡下觀察治療組和對(duì)照組標(biāo)本成纖維細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化。 6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPASS11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理軟件，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果: 1光鏡觀察 1.1 HE染色及纖維包膜厚度測(cè)定光鏡下治療組，可見(jiàn)大量的成纖維細(xì)胞，并有新生薄壁的毛細(xì)血管散在，并有大量中幼期的成纖維細(xì)胞，幼稚期的成纖維細(xì)胞胞體較大，兩端有突起，胞漿因略呈嗜堿性而略顯藍(lán)色；對(duì)照組中有

6、大量的成纖維細(xì)胞，并以成熟期的成纖維細(xì)胞(纖維細(xì)胞)為多，形態(tài)呈長(zhǎng)梭形，胞漿漸少，核較治療組深染。比較治療組與對(duì)照作可見(jiàn)：治療組中幼稚期的成纖維細(xì)胞數(shù)目明顯比對(duì)照組多，而對(duì)照組中成熟期的成纖維細(xì)胞即纖維細(xì)胞數(shù)目明顯比治療組多，隨機(jī)選取光鏡100倍HE染色切片治療組與對(duì)照組各15個(gè)視野，應(yīng)用顯微標(biāo)尺測(cè)量HE染色切片中纖維包膜的厚度。結(jié)果：治療組纖維包膜厚度532.500±112.033μm對(duì)照組纖維包膜厚度897.000±206.023μ

7、m兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。 1.2 Masson染色及圖像定量分析光鏡下觀察Masson染色切片，治療組。纖維包膜厚度的3/6-5/6呈灰色，其中可見(jiàn)散在的成纖維細(xì)胞，排列疏松，核呈灰黑色，卵圓形。其余2/6-1/6呈綠色，其中成纖維細(xì)胞核呈細(xì)梭形，灰黑色，排列疏松，并可見(jiàn)一層內(nèi)皮細(xì)胞樣內(nèi)襯；對(duì)照組，纖維包膜全層綠色，成纖維細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，松散分布，有散在內(nèi)皮細(xì)胞樣梭形細(xì)胞。圖像定量分析，治療組平均灰度169.935

8、±16.015，對(duì)照組平均灰度156.945±13.546，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。 1.3 CD34染色及毛細(xì)血管數(shù)量觀察光鏡下CD34染色切片中可見(jiàn)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞被標(biāo)記成黃褐色，散在于視野中，隨機(jī)選取光鏡100倍CD34染色切片治療組與對(duì)照組各15個(gè)視野，人工計(jì)數(shù)毛細(xì)血管數(shù)量，結(jié)果：治療組毛細(xì)血管數(shù)量平均每視野8.300±2.002個(gè)，對(duì)照組平均每視野7.900±1.287個(gè)，兩組比較治療組與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差

9、異(P＞0.05)。 2透射電鏡觀察治療組：成纖維細(xì)胞內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張成池狀，數(shù)量明顯減少，脫顆?，F(xiàn)象明顯，線粒體部分或大部分嵴融合或消失，偶見(jiàn)正常高爾基氏體，未見(jiàn)或偶見(jiàn)微絲結(jié)構(gòu)，游離核糖體數(shù)量減少；對(duì)照組：成纖維細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)擴(kuò)張的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，少見(jiàn)脫顆?，F(xiàn)象，線粒體嵴基本完整，可見(jiàn)許多明顯的微絲結(jié)構(gòu)，核糖體數(shù)量未見(jiàn)明顯減少。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)高度擴(kuò)張成池狀。有不典型的高而基復(fù)合體。染色質(zhì)豐富，細(xì)胞周圍有許多成熟的膠原纖維。 結(jié)論: