中風(fēng)痰瘀阻絡(luò)證及肝陽暴亢證與AGT基因多態(tài)性的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：探討中風(fēng)兩種常見中醫(yī)證型(風(fēng)痰瘀血痹阻脈絡(luò)證及肝陽暴亢風(fēng)火上擾證)與血管緊張素原(AGT)基因M235T多態(tài)性的相關(guān)性，通過對(duì)AGT基因型及等位基因在兩種中醫(yī)證型上的頻率分布進(jìn)行基礎(chǔ)性研究，為中風(fēng)的中醫(yī)辯證分型提供分子生物學(xué)依據(jù)，為中風(fēng)證候研究提供新的思路。 方法： 1、研究對(duì)象：為2006-2007年于湖北省中醫(yī)院以及武漢市第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院病例104例，健康對(duì)照組50例。中醫(yī)診斷參照1996年國家中醫(yī)藥管理局

2、醫(yī)政司腦病急癥協(xié)作組制定的《急性缺血性腦卒中患者處理建議》及《中風(fēng)病辨證診斷標(biāo)準(zhǔn)》，符合風(fēng)痰瘀血痹阻脈絡(luò)證及肝陽暴亢風(fēng)火上擾證，西醫(yī)診斷參照1995年中華全國腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議制定《各類腦血管疾病的診斷要點(diǎn)》，診斷為缺血性腦卒中，無意識(shí)障礙；將104例樣本隨機(jī)分為兩組，其中A組為風(fēng)痰瘀血痹阻脈絡(luò)證，56例；B組為肝陽暴亢風(fēng)火上擾證，48例；年齡均為40～80歲。并且記錄兩組一般及臨床資料(年齡：血壓、空腹血糖、總膽固醇以及甘油三酯)。

3、 2、全血樣本進(jìn)行分離提取DNA：抽取104例中風(fēng)患者及50例健康對(duì)照者的肘靜脈血2ml置于抗凝管內(nèi)作為實(shí)驗(yàn)樣本，然后對(duì)樣本進(jìn)行分離提取DNA。 3、聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析法(PCR-RFLP)：對(duì)分離提取的DNA進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5％瓊脂糖凝膠電泳，在紫外燈下觀察電泳結(jié)果。同時(shí)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行限制性內(nèi)切酶消化，酶切產(chǎn)物進(jìn)行1.5％瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果并記錄。 4、數(shù)據(jù)的統(tǒng)

4、計(jì)分析：記錄的結(jié)果運(yùn)用基因計(jì)數(shù)法計(jì)算基因頻率，A、B兩組與對(duì)照組基因型和等位基因頻率分布比較用x2檢驗(yàn)，A、B兩組危險(xiǎn)因素的統(tǒng)計(jì)用-x±s，組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)。 結(jié)果： 1、血管緊張素原(AGT)基因經(jīng)PCR擴(kuò)增后產(chǎn)物為一條163bp的DNA片段。PCR產(chǎn)物經(jīng)過Tthl11-I內(nèi)切酶消化后最終電泳有三種結(jié)果分別為AGT基因M等位基因純合型(235MM型)因無酶切位點(diǎn)，酶切后電泳顯示一條163bp的條帶，AGT基因T等位

5、基因純合型(235TT型)因在外顯子2核苷酸704處T變成C，故酶切后電泳產(chǎn)生一條140bp的條帶，ACT基因M235T雜合型(235MT型)則同時(shí)具有163bp和140bp兩種條帶。 2、A、B兩組的臨床資料(年齡、性別、酯)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，經(jīng)t檢驗(yàn)比較年齡、血壓、空腹血糖、總膽固醇以及甘油三空腹血糖、膽固醇及甘油三酯差異均無顯著性(p>0.05)，血壓差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。 3、A、B兩組與對(duì)照組進(jìn)行AGT基因

6、M235T多態(tài)性基因型及等位基因頻率分布比較，結(jié)果顯示中風(fēng)組(A、B兩組之合計(jì))TT基因型頻率明顯高于對(duì)照組(X2=5.77 P<0.05)，且T等位基因頻率也明顯高于對(duì)照組(X2=9.75 P<0.01)；A、B兩組分別與對(duì)照組比較，結(jié)果顯示B組與對(duì)照組在TT基因型頻率差異上有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=5.95 P<0.05)，A、B組T等位基因頻率與對(duì)照組均有明顯差異(X2=5.74 P<0.05；X2=9.60 P<0.01)；但是兩種中

7、風(fēng)證型的基因型及等位基因頻率分布差別無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=1.56，P>0.05； X2=1.14，P>0.05)。 結(jié)論：通過對(duì)104例缺血性腦卒中患者及50例健康對(duì)照者血液樣本的實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn)，血管緊張素原(AGT)基因型的例數(shù)比較，TT型>MT型>MM型；等位基因頻率T>M；AGT-TT基因型或T等位基因可能在缺血性腦卒中發(fā)生中起作用；中風(fēng)肝陽暴亢風(fēng)火上擾證與AGT-TT基因型相關(guān)，而兩種中風(fēng)證型均與T等位基因相關(guān)；風(fēng)痰