沙利度胺對Slit2-Robo1信號在胃腸道血管畸形發(fā)病機(jī)制中的作用的影響.pdf

1、背景：沙利度胺是治療胃腸道血管畸形（Gestrointestinal Vascular Malformation，GIVM）的特效藥物。其機(jī)制被認(rèn)為與其抑制促血管新生因子合成有關(guān)。目前發(fā)現(xiàn)神經(jīng)軸突誘導(dǎo)因子 Slit2與其配體Robo1在血管新生過程中具有重要的生物學(xué)功能
　　目的：探討 Slit2/Robo1信號在胃腸道血管畸形發(fā)病機(jī)制中的作用以及沙利度胺對其表達(dá)的影響。
　　方法：1）收集7例胃腸道血管畸形患者血管病變組織

2、與正常黏膜組織，采用免疫組織化學(xué)法以及免疫印跡法檢測 Slit2蛋白水平的表達(dá)和分布。
　　2）體外培養(yǎng)原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞至對數(shù)生長期，同步化后用不同濃度的沙利度胺（50、100、200mg/L）作用24-48h后，實時定量 PCR法測定處理組與對照組的 Slit2，Robo1，VEGF mRNA表達(dá)水平;免疫印跡及酶聯(lián)免疫吸附試驗方法測定 Slit2，Robo1，VEGF蛋白表達(dá)水平;測定處理組與對照組細(xì)胞增殖、遷移以及血管形

3、成能力的變化。
　　3）體外培養(yǎng)原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞至對數(shù)生長期，同步化后用采用沙利度胺，重組人 N-Slit2以及 PI3K抑制劑 LY294002作用24-48h后，實時定量PCR法測定處理組與對照組的VEGF mRNA表達(dá)水平，免疫印跡以及酶聯(lián)免疫吸附試驗方法測定總AKT，磷酸化AKT（pAKT），VEGF蛋白表達(dá)水平，流式細(xì)胞術(shù)測定 HUVEC細(xì)胞周期分布。CCK8，劃痕實驗以及血管形成實驗測定處理組與對照組細(xì)胞增殖、遷移

4、以及血管形成能力的變化
　　結(jié)果：1）胃腸道血管畸形患者血管病變組織中Slit2蛋白表達(dá)水平顯著高于正常黏膜組織(5/7 vs.1/7,p<0.05)。
　　2）沙利度胺能夠明顯抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 Slit2，Robo1，VEGF基因與蛋白的表達(dá)，以及抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞殖、遷移以及血管形成（P<0.01）。
　　3）重組人N-Slit2與對照組相比，可明顯促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞VEGF的合成以及AKT的磷酸化，并促進(jìn)