間充質(zhì)干細(xì)胞與骨腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系研究.pdf

1、目的: 本研究的總體目標(biāo)是探討間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)與骨腫瘤生長(zhǎng)的關(guān)系，為骨腫瘤的治療尋找新的靶點(diǎn)和治療策略。具體目標(biāo)包括： 1.比較骨腫瘤患者與健康對(duì)照者外周血中具備MSC表型的細(xì)胞比例和血漿中細(xì)胞因子含量的差異。 2.在體外分析MSC與骨肉瘤細(xì)胞之間的相互作用及其分子機(jī)制。 3.探討MSC對(duì)體內(nèi)骨肉瘤生長(zhǎng)的影響以及MSC對(duì)骨肉瘤的趨向性。 方法: 1.通過(guò)CD105、CD34，CD45

2、表面標(biāo)志的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，分析骨的肉瘤患者以及健康對(duì)照者外周血中MSC樣細(xì)胞的數(shù)量，分離培養(yǎng)外周血中的單核細(xì)胞，同時(shí)獲取分離的血漿進(jìn)行細(xì)胞因子檢測(cè)。 2.將MSC與SaOS-2骨肉瘤細(xì)胞分別用對(duì)方的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的增殖。并分析二者的條件培養(yǎng)基以及普通的培養(yǎng)基對(duì)MSC成骨及成脂分化的影響。用抗體芯片法檢測(cè)條件培養(yǎng)基內(nèi)細(xì)胞因子的含量。 3.將SaOS-2骨肉瘤細(xì)胞、MSC或二者混合后一同接種于裸小鼠脛骨近

3、端髓腔內(nèi)，比較各組動(dòng)物的體重增加值，細(xì)胞注射側(cè)后肢以及腫瘤體積大小，各組的腫瘤形成率以及血漿堿性磷酸酶(ALP)活性的差異。將綠色熒光蛋白(GFP)標(biāo)記的MSC通過(guò)尾靜脈注入荷瘤裸鼠體內(nèi)，了解MSC在鼠體內(nèi)的分布。 結(jié)果: 1.流式細(xì)胞術(shù)的檢測(cè)結(jié)果表明骨的肉瘤患者外周血中具有MSC表型的細(xì)胞(CD34-，CD45-，CD105+)數(shù)量增加，為對(duì)照組的9.12倍，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.04)。血漿細(xì)胞因子的ELISA檢測(cè)

4、結(jié)果顯示骨的肉瘤患者的外周血血漿中的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)濃度顯著高于對(duì)照組(p-0.038)；而血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、瘦素以及基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1)的濃度無(wú)顯著性差異。 2.MTT檢測(cè)顯示MSC與骨肉瘤細(xì)胞的條件培養(yǎng)基可以促進(jìn)彼此的增殖。骨肉瘤細(xì)胞的條件培養(yǎng)基可以抑制MSC的成骨及成脂分化。此外，MSC與骨肉瘤細(xì)胞對(duì)彼此的條件培養(yǎng)基具有趨向性。抗體芯片結(jié)果顯示MSC與骨肉瘤細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)的條件培養(yǎng)基內(nèi)的白細(xì)

5、胞介素-6(IL-6)與受激活調(diào)節(jié)的正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RANTES)的濃度高于二者分別單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)的條件培養(yǎng)基內(nèi)的濃度(>2倍)。 3.細(xì)胞注射8周時(shí)，X線與病理檢查顯示單純注射MSC的動(dòng)物組無(wú)腫瘤形成。單純注射骨肉瘤細(xì)胞的動(dòng)物與混合注射的裸鼠均有腫瘤形成，且腫瘤形成率、肺轉(zhuǎn)移率以及腫瘤結(jié)構(gòu)相似，二組的體重增加值明顯低于單純MSC注射組(p<0.05)?；旌献⑸鋭?dòng)物組的腫瘤體積以及患肢的體積明顯大于單純骨肉瘤細(xì)胞注射組(p

6、<0.05)，血漿ALP活性顯著也高于單純骨肉瘤細(xì)胞注射組與單純MSC注射組(p分別為0.029與0.003)。此外冰凍切片檢查顯示通過(guò)尾靜脈輸入荷瘤鼠體內(nèi)的MSC選擇性地分布于腫瘤組織內(nèi)。 結(jié)論: 1.骨的肉瘤患者外周血內(nèi)MSC樣細(xì)胞數(shù)量較正常對(duì)照者明顯增加，血漿內(nèi)HGF的水平顯著升高，外周血內(nèi)MSC數(shù)量的增加可能是通過(guò)這一因子介導(dǎo)的。 2.體外培養(yǎng)的MSC與骨肉瘤細(xì)胞存在相互作用，這種相互作用可能是通過(guò)可溶性