別嘌呤醇對(duì)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的: 本實(shí)驗(yàn)通過制備新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)模型，腹腔注射外源性別嘌呤醇(ALLO)，觀察ALL0對(duì)新生HIBD大鼠腦組織超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羥自由基(·OH)及caspase-3基因表達(dá)的影響，以探討ALLO保護(hù)腦組織的機(jī)制，以期為臨床治療新生兒HIBD提供有效的方法和途徑。 方法: 1.制備HIBD模型：將新生7日齡Wistar大鼠行頸部正中切口，分離結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈后給

2、予低氧(8％O2，92％N2)處理2小時(shí)，制成HIBD模型。觀察缺氧時(shí)動(dòng)物行為變化。 2.行為能力檢查：分別于手術(shù)前及缺氧后1小時(shí)對(duì)每只新生大鼠進(jìn)行翻身能力、夾尾左旋測(cè)試。 3.腦大體形態(tài)檢查：分別于處死時(shí)觀察每只新生大鼠腦組織的大體形態(tài)。 4.SOD、MDA、·OH及caspase-3基因表達(dá)測(cè)定：56只新生7日齡Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham)、生理鹽水對(duì)照組(NS)和ALLO干預(yù)組(ALLO)。

3、假手術(shù)組(8只)只予分離但不結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈，于手術(shù)恢復(fù)后24h處死。其余兩組于缺氧結(jié)束后lh和24h兩次腹腔注射生理鹽水或ALLO，并于末次給藥后0.5h、24h以及72h處死(每組8只動(dòng)物)，以患側(cè)腦組織為標(biāo)本，應(yīng)用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD，應(yīng)用改良的硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA，應(yīng)用Fenton反應(yīng)測(cè)定·OH，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄酶一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)測(cè)定caspase-3基因的表達(dá)。 結(jié)果: 1.行為能力檢查術(shù)前每

4、只大鼠均做翻身能力、夾尾左旋測(cè)定，56只全部正常。sham組測(cè)定結(jié)果同前。經(jīng)歷缺氧缺血的48只大鼠，26只不能翻身，38只出現(xiàn)夾尾左旋，16只表現(xiàn)不能翻身和夾尾左旋同時(shí)存在。 2.腦大體檢查新生大鼠HIBD后NS對(duì)照組結(jié)扎側(cè)半球腦組織受損嚴(yán)重，在24h時(shí)蒼白、水腫明顯，體積明顯大于對(duì)側(cè)，72h可看到結(jié)扎側(cè)半球局部出現(xiàn)液化壞死灶；ALLO干預(yù)組大鼠未見上述改變或僅見結(jié)扎側(cè)腦半球輕微的水腫；sham組大鼠大腦半球左右對(duì)稱，未見任何病

5、理變化。 3.SOD、MDA、·OH表達(dá)檢測(cè)結(jié)果與sham組比較，MDA、·OH在HIBD后24h、72hNS對(duì)照組的表達(dá)明顯增高(P<0.05)，而ALLO干預(yù)組水平則較同時(shí)間點(diǎn)的NS對(duì)照組低(P<0.05)?？係OD活力在HIBD后24h、72hNS對(duì)照組明顯降低，與sham組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而ALLO干預(yù)組水平則較同時(shí)間點(diǎn)的NS對(duì)照組有所回升(P

6、sham組兩兩比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4.caspase-3基因表達(dá)檢測(cè)結(jié)果與sham組比較，caspase-3基因在HIBD后24h、72hNS對(duì)照組表達(dá)明顯增高(P<0.05)，而ALLO干預(yù)組水平則較同時(shí)間點(diǎn)的NS對(duì)照組低(P<0.05)。HIBD后24h、72hNS對(duì)照組與假手術(shù)組、與同時(shí)間點(diǎn)ALLO干預(yù)組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而HIBD后0.5hNS對(duì)照組與ALLO干預(yù)組及sham組兩兩比較