人骨髓間充質(zhì)干細胞對外周血T淋巴細胞的免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤效應(yīng)的影響.pdf

1、目的 建立骨髓間充質(zhì)干細胞 (mesenchymal stem cells MSCs) 培養(yǎng)、擴增與鑒定及外周血T淋巴細胞分離、純化的方法；觀察MSCs及上清對T淋巴細胞增殖及分泌IL-4、IFN-γ的影響；MSCs對T淋巴細胞增殖影響的可逆性研究；MSCs對T淋巴細胞殺傷K562細胞的影響并探討可能機制。 方法 密度梯度離心法分離出單個核細胞，細胞貼壁法培養(yǎng)并擴增MSCs，倒置相差顯微鏡觀察MSCs細胞形態(tài)，流

2、式細胞術(shù)檢測MSCs表面抗原、地塞米松誘導(dǎo)MSCs向脂肪細胞分化；尼龍棉柱法從外周血分選出T淋巴細胞，流式細胞術(shù)進行鑒定；MTT法測定MSCs對T淋巴細胞增殖的影響，ELISA法檢測反應(yīng)體系中IFN-γ、IL-4的分泌：MTT法測定MSCs對T淋巴細胞增殖影響的可逆性；LOH法檢測T淋巴細胞對K562細胞的殺傷，ELISA法檢測反應(yīng)體系IFN-γ、IL-4的分泌，流式細胞術(shù)檢測CD4<'+>、CD8<'+>、CD4<'+>CD25<'+

3、>T淋巴細胞的比例。 結(jié)果 MSCs形態(tài)均勻一致，生長曲線顯示增殖能力強，流式細胞儀檢測顯示CD44、CD13高表達，經(jīng)地塞米松誘導(dǎo)后MSCs向脂肪細胞分化，尼龍棉柱法分離的單個核細胞其CD3陽性細胞高表達；MSCs及上清對T淋巴細胞增殖表現(xiàn)為抑制效應(yīng)；MSCs及上清抑制T淋巴細胞IFN-γ的分泌，MSCs促進T淋巴細胞IL-4的分泌，上清本身并不能促進IL-4分泌；MSCs對T淋巴細胞增殖抑制具有可逆性；MSCs處理的

4、T淋巴細胞CD4<'+>、CD4<'+>CD25<'+>亞群升高，MSCs減弱了T淋巴細胞對K562細胞的殺傷效應(yīng)，同時IFN-γ分泌減少、IL-4分泌增加。 結(jié)論 本實驗獲得性能可靠的MSCs及T淋巴細胞；MSCs及上清對T淋巴細胞增殖表現(xiàn)為抑制效應(yīng)，其作用機制可能包括直接接觸及分泌細胞因子兩種途徑；MSCs及上清抑制T淋巴細胞IFN-γ的分泌，MSCs卻促進T淋巴細胞IL-4的分泌，MSCs可能通過改變T淋巴細胞分泌