兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對腫瘤局部免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)體外對T淋巴細(xì)胞免疫功能的影響。 方法：密度梯度離心法聯(lián)合細(xì)胞貼壁法分離培養(yǎng)擴(kuò)增MSCs，流式細(xì)胞儀檢測MSCs表面抗原，培養(yǎng)的MSCs行酸性磷酸酶染色(ACP)、過碘酸-雪夫染色(PAS)、堿性磷酸酶染色(NAP)；應(yīng)用尼龍棉柱分離T淋巴細(xì)胞；用植物血凝素(PHA)刺激與或未與MSCs共培養(yǎng)3天的T淋巴細(xì)胞，應(yīng)用MTT法測定T淋巴細(xì)胞的增殖，ELISA法檢測反應(yīng)體系中IL-2、IL-4、

2、IL-10、IFN-γ的分泌。 結(jié)果：MSCs形態(tài)均勻，生長曲線顯示增長能力強(qiáng)，MSCs鑒定：ACP(-)，PAS(+)，NAP(-)，CD29(+)，CD34(-)，CD44(+)，CD45(-)，Ⅰ型膠原和Ⅱ型膠原均有表達(dá)。MSCs及其培養(yǎng)上清抑制PHA刺激引起的T淋巴細(xì)胞的增殖，且這種抑制作用是呈劑量依賴性的。MSCs及其培養(yǎng)上清抑制T淋巴細(xì)胞IL-2、IFN-γ的分泌；MSCs促進(jìn)T淋巴細(xì)胞IL-4、IL-10的分泌。

3、 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)獲得性能可靠的兔MSCs；MSCs及其培養(yǎng)上清對T淋巴細(xì)胞增殖表現(xiàn)為抑制效應(yīng)，MSCs抑制Th1細(xì)胞分泌IL-2和IFN-γ，但對Th2細(xì)胞分泌Ⅱ-4和IL-10的作用相反。此外，MSCs培養(yǎng)上清液亦可抑制IL-2和IFN-γ。其抑制T淋巴細(xì)胞增殖的作用機(jī)制可能包括直接接觸及通過改變T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的種類和數(shù)量影響T淋巴細(xì)胞增殖。 意義：本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明MSCs可能通過可溶性因子調(diào)節(jié)Th1/Th2反應(yīng)平衡