NKT細胞免疫調(diào)節(jié)及殺傷功能的體外實驗研究.pdf

1、目的： 研究探討自然殺傷性T細胞（natural killer T cell，NKT）進行NKT細胞免疫調(diào)節(jié)及殺傷功能的實驗研究。 方法： （1）建立混合淋巴細胞培養(yǎng)體系（mixed lymphocyte cultured system，MLC），以總淋巴細胞為效應(yīng)細胞，B16F10-luc-G5細胞為靶細胞，NKT細胞或CD4＋CD25＋T細胞為調(diào)節(jié)細胞。調(diào)節(jié)功能實驗組分為3組，每組均為3個復(fù)孔：NKT研究組，

2、效靶比為10：1，每孔加5×104個NKT細胞＋2.5×103個腫瘤細胞+5×104個總淋巴細胞；CD4＋CD25＋T研究組，效靶比為10：1，每孔加2.5×104個CD4＋CD25＋T細胞＋2.5×103個腫瘤細胞+5×104個總淋巴細胞；對照組，每孔加腫瘤 2.5×103個。 （2）殺傷功能實驗組分組同上，NKT研究組，效靶比為10：1，每孔加5×104個NKT細胞＋2.5×103個腫瘤細胞；NK研究組，效靶比為10：1，每

3、孔加2.5×104個NK細胞＋2.5×103個腫瘤細胞；對照組，同上。混合培養(yǎng)24、48、72h后，通過活體成像系統(tǒng)檢測該培養(yǎng)系統(tǒng)的靶細胞生物發(fā)光，以監(jiān)測NKT細胞的調(diào)節(jié)及殺傷功能。 結(jié)果： 調(diào)節(jié)功能混培系統(tǒng)中：（1）NKT研究組的24h所測平均光子數(shù)為[（3.86E+05）±10032]；48h平均光子數(shù)為[(4.53E+05)±12787]；72h平均光子數(shù)為[(6.22E+05)±10204]。（2）CD4＋CD2

4、5＋T研究組的24h平均光子數(shù)為[(4.16E+05)±7032]；48h平均光子數(shù)為[(4.06E+05)±11902]；72h平均光子數(shù)為[(6.48E+05)±18322]。（3）對照組的24h平均光子數(shù)為[(8.55E+04)±5426]；對照組的48h平均光子數(shù)為[(5.07E+04)±4752]；對照組的72h平均光子數(shù)為[(9.33E+04)±9513]。研究組1與對照組、研究組2與對照組所測平均光子數(shù)比較，有顯著統(tǒng)計學(xué)差

5、異（P<0.05）。 殺傷功能混培系統(tǒng)中：（1）NKT研究組的24h所測平均光子數(shù)為[（2.06E+05）±20208]；48h平均光子數(shù)為[(2.53E+05)±7512]；72h平均光子數(shù)為[(4.22E+05)±16134]。（2）NK研究組的24h平均光子數(shù)為[(4.72E+04)±1398]；48h平均光子數(shù)為[(5.52E+04)±1571]；72h平均光子數(shù)為[(1.19E+05)±2175]。（3）對照組的24h

6、平均光子數(shù)為[(8.55E+04)±5426]；對照組的48h平均光子數(shù)為[(5.07E+04)±4752]；對照組的72h平均光子數(shù)為[(9.33E+04)±9513]。研究組1與對照組、研究組2與對照組所測平均光子數(shù)比較，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。 結(jié)論： （1）：NKT細胞具抑制總淋巴細胞對B16F10-luc-G5腫瘤細胞的殺傷效應(yīng)，且抑制效應(yīng)具有時間性；調(diào)節(jié)作用比CD4＋CD25＋T細胞強。（2）：NK