2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩129頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、第一部分 mTOR信號通路受抑制對巨噬細胞極化和炎癥因子分泌的影響
  目的:巨噬細胞在受到炎癥信號、應激、代謝物等刺激下會向促炎性(M1型)或抗炎性(M2型)方向極化,并呈現(xiàn)不同水平的促炎性或抗炎性媒介分泌譜。哺乳動物雷帕霉素靶蛋白/雷帕霉素機能靶蛋白(Mammalian/Mechanistic Target of雷帕霉素,mTOR)信號通路是生長、發(fā)育、代謝、免疫、癌癥等生理活動的主要調控者,本研究旨在探討雷帕霉素作用導致的m

2、TOR信號通路改變對脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)、棕櫚酸(Palmitic acid,PA)及油酸(Oleic acid,OA)刺激下巨噬細胞的M1/M2極化趨勢及相應的炎癥介質分泌的影響。
  方法:將Raw264.7小鼠巨噬細胞穩(wěn)定株均勻鋪板后,分成以下幾組:①未干預組;②刺激物單獨干預組;③mTOR信號通路抑制劑雷帕霉素干預組;④刺激物+雷帕霉素共同干預組。刺激物分別為LPS、PA和OA,選取最佳干

3、預物濃度和作用時間進行干預試驗,干預結束后收集細胞提取mRNA,通過qRT-PCR檢測巨噬細胞募集、促炎及抗炎相關基因的表達。
  結果:①在LPS誘導經(jīng)典的促炎性模型中,與未干預組相比,LPS刺激顯著提高促炎性因子IL-1β的水平,而雷帕霉素刺激也可促進IL-1β的表達,兩者共同刺激時對基因的表達具有疊加效應。②與未干預組相比,PA單獨刺激可顯著提高IL-1β水平;雷帕霉素刺激可抑制巨噬細胞募集相關基因MCP-1的表達,同樣兩者

4、共同刺激對于IL-1β表達的促進和MCP-1表達的抑制有疊加作用。③與未干預組相比,OA單獨刺激可促進IL-1β及Mrc1表達;而加用雷帕霉素能顯著抑制OA對MCP-1的正調控作用,同樣對于IL-1β與Mrc1表達的促進有疊加作用。
  結論:LPS、PA及OA都能夠誘導巨噬細胞M1型極化,促進促炎因子的分泌;mTOR信號通路抑制也可誘導巨噬細胞M1型極化,促進促炎性因子分泌,促進部分抗炎性介質的分泌。
  第二部分巨噬細胞

5、特異性敲除Rheb1蛋白對高脂誘導的肥胖小鼠整體代謝水平的影響
  目的:建立巨噬細胞Rheb1敲除的小鼠模型,通過高脂喂養(yǎng)建立肥胖小鼠模型,研究巨噬細胞Rheb1敲除的小鼠對高脂誘導的肥胖及糖脂代謝的作用。
  方法:構建并通過提取尾尖DNA電泳、分離原代巨噬細胞行qPCR及Western-Blot等方式鑒定Rheb1巨噬細胞敲除小鼠模型。將5-6周齡敲除小鼠(KO小鼠,實驗組)與同窩野生型Rheb1flox/flox小鼠

6、(WT小鼠,對照組)分別進行4個月高脂食物飼養(yǎng)(high-fatdiet, HFD)和普通食物喂養(yǎng)(normal diet,ND)。實驗結束后檢測小鼠體重和食物消耗量,通過GTT及ITT檢測小鼠葡萄糖耐受及胰島素敏感性情況。通過大體和切片HE染色、油紅O染色及免疫熒光等手段觀察肝臟、脂肪及肌肉的形態(tài)學改變。
  結果:①通過尾尖提取DNA經(jīng)PCR擴增及瓊脂糖電泳、提取原代巨噬細胞mRNA后行qRT-PCR以及提取蛋白行Wester

7、n-Blot試驗鑒定Rheb1flox/flox F4/80 CreTg0(KO)與Rheb1flox/flox(WT)兩種基因型。②自第10周齡起,高脂組小鼠的平均體重明顯高于正常喂養(yǎng)組,高脂組兩組小鼠體重比較在第19及20周齡具有顯著差異。③GTT結果示,高脂10周與同期正常喂養(yǎng)時WT與KO小鼠的葡萄糖耐量無統(tǒng)計學差異;而16周后兩組小鼠的葡萄糖耐量有統(tǒng)計學差異,通過曲線下面積及各血糖監(jiān)測時間點的比較得出KO組的葡萄糖耐量更差。④I

8、TT結果示,高脂喂養(yǎng)10周時兩組小鼠胰島素敏感性無統(tǒng)計學差;,而在16周后,KO小鼠組的胰島素敏感性遠遠優(yōu)于WT小鼠。⑤高脂喂養(yǎng)5個月后,無論是空腹還是喂食狀態(tài)下,KO組小鼠的肝臟較WT組體積明顯偏小,重量明顯減輕,且脂肪肝程度減輕,而同齡正常飲食下兩組小鼠的肝臟重量無明顯差別,油紅O染色及HE染色一致表明KO組肝臟脂肪變性及受損程度減輕;同時,高脂喂養(yǎng)下KO組脂肪組織血管基質層有明顯的炎癥細胞。而高脂喂養(yǎng)下兩組小鼠的肌肉組織無明顯形態(tài)

9、學差別。
  結論:巨噬細胞Rheb1蛋白特異性敲除,可延緩肥胖的發(fā)展,在損害葡萄糖耐量的同時改善高脂喂養(yǎng)下周圍血糖調節(jié)靶器官的胰島素敏感性,減輕因長期高脂飲食誘發(fā)的胰島素抵抗,該改善作用可能與延緩脂肪肝發(fā)展有關。
  第三部分巨噬細胞特異性敲除Rheb1蛋白對高脂誘導的脂肪肝的作用
  目的:探討巨噬細胞特異性敲除Rheb1蛋白后對高脂誘導的脂肪肝形成及發(fā)展的作用,以及對肝臟巨噬細胞浸潤、促炎/抗炎炎癥譜及糖脂代謝功

10、能的影響。
  方法:PTT檢測高脂喂養(yǎng)下WT組與KO組小鼠肝臟糖異生功能的變化。獲取禁食過夜的WT組與KO組小鼠肝臟組織,通過qRT-PCR法檢測巨噬細胞浸潤極化、促炎/抗炎炎癥譜、糖脂代謝相關酶mRNA水平上的表達改變。
  結果:①PTT結果示高脂喂養(yǎng)4個月后,兩組小鼠的丙酮酸耐量整體有差異雖未達到統(tǒng)計學水平,較GTT兩組血糖變化差異明顯減小。②qRT-PCR結果示KO組小鼠巨噬細胞浸潤指標、M2型抗炎癥指標和大部分M

11、1型促炎癥指標基因表達較WT組表達降低;KO組小鼠肝臟中與肝糖原分解的G-6Pase、與脂質合成的ACC及SREBP1基因表達水平較WT組有顯著下降。
  結論:巨噬細胞Rheb1敲除后可改善高脂誘導肥胖相關的脂肪肝進展,可能與改善肝臟糖脂代謝調節(jié)功能、減少肝臟巨噬細胞浸潤及促炎性介質的分泌有關。
  第四部分巨噬細胞特異性敲除Rheb1基因對脂肪組織的影響
  目的:探討巨噬細胞特異性敲除Rheb1蛋白后對高脂誘導的

12、肥胖小鼠皮下脂肪、性腺脂肪、內臟脂肪及褐色脂肪中的巨噬細胞浸潤、促炎/抗炎炎癥譜及產熱、褐色化功能的影響。
  方法:獲取高脂喂養(yǎng)WT組與KO組小鼠皮下脂肪、性腺脂肪、腸系膜間脂肪及褐色脂肪,通過qRT-PCR法檢測巨噬細胞浸潤、促炎/抗炎炎癥譜、產熱及褐色化功能mRNA水平上的改變。
  結果:①qRT-PCR結果示高脂喂養(yǎng)時,KO組小鼠的皮下脂肪組織中大部分M1型炎癥指標及部分M2型炎癥指標表達水平較WT組降低;在性腺脂

13、肪組織中,KO組的F4/80表達下降,各種M1型指標表達變化趨勢不一,但絕大部分M2型指標基因表達水平上升;在褐色脂肪組織中主要表現(xiàn)為,KO組的F4/80表達水平顯著提高,大多數(shù)M2型指標(IL-4,IL-10,Mrc1,Mgl2),巨噬細胞浸潤程度改變與性腺脂肪的截然相反,但同時具有向M2型極化的趨勢;而在腸系膜脂肪組織中的巨噬細胞浸潤程度及M1/M2型極化趨勢在WT組與KO組中無統(tǒng)計學差異。②皮下脂肪及性腺脂肪組織中表達CD11c+

14、CD206-標記物的細胞在KO組小鼠中表達減少,而表達CD11c-CD206+標記物的細胞比例稍增加,同時這兩種細胞群的比值在KO組小鼠中同樣是降低的趨勢,尤其是在皮下脂肪組織內。③較WT組相比,KO組皮下脂肪組織中PAPRγ、Prdm16、UCP1表達有顯著上升;在性腺脂肪中,除Prdm16外的其他產熱及褐色化基因表達改變趨勢同皮下組織;在褐色脂肪組織中,KO組所有待測基因的表達水平均顯著高于WT組,尤其是PGC1α、Cidea、PA

15、PRγ、Prdm16和UCP1;腸系膜脂肪組織中僅PAPRγ的表達改變有統(tǒng)計學意義(P<0.05),同時PAPRγ還是M2型炎癥的一個指標,余產熱及褐色化功能相關基因改變不顯著。
  結論:巨噬細胞Rheb1敲除后,高脂喂養(yǎng)導致的皮下脂肪組織內所浸潤的巨噬細胞M2型極化與脂肪產熱及褐色化功能增強有正相關性,而褐色脂肪組織中巨噬細胞浸潤增加以及M2型極化也與脂肪產熱及褐色化功能增強有正相關性;性腺脂肪巨噬細胞浸潤極化與脂肪產熱及褐色

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論