納豆菌糖肽對小鼠巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用及相關(guān)機(jī)理的研究.pdf

1、本文研究了納豆菌糖肽（BNGP），對正常狀態(tài)及脂多糖（LPS）激活狀態(tài)巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用及其相關(guān)機(jī)制，采用不同濃度的BNGP單獨(dú)處理或LPS和不同濃度的BNGP共同處理RAW264.7巨噬細(xì)胞，檢測各項(xiàng)指標(biāo)，研究結(jié)果如下：
　　1、從小鼠腹腔中分離、培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，采用噻唑藍(lán)（MTT）比色法檢測細(xì)胞增殖作用，中性紅吞噬試驗(yàn)檢測吞噬能力，Griess試劑檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中NO含量，酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）檢測細(xì)胞培養(yǎng)

2、上清液中細(xì)胞因子（IL-1β、TNF-α）、促炎介質(zhì)（PGE2）含量。試驗(yàn)結(jié)果顯示：納豆菌糖肽（BNGP）在31.25-500μg/mL濃度范圍內(nèi)對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的代謝活力均有顯著提升作用，在62.5-500μg/mL濃度范圍內(nèi)對細(xì)胞分泌NO、IL-1β、TNF-α、PGE2有顯著的促進(jìn)作用，并呈現(xiàn)出一定的劑量相關(guān)性，其中BNGP濃度為500μg/mL時(shí)促進(jìn)作用最大。當(dāng)細(xì)胞處于LPS激活狀態(tài)時(shí)，BNGP在62.5-500μg/mL濃度

3、范圍內(nèi)能協(xié)同LPS增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力，但能抑制IL-1β、TNF-α、PGE2的分泌，而對NO的分泌無顯著影響。
　　2、培養(yǎng)RAW264.7巨噬細(xì)胞，采用噻唑藍(lán)（MTT）比色法檢測細(xì)胞增殖作用，中性紅吞噬試驗(yàn)檢測吞噬能力，Griess試劑檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中NO含量，酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子（IL-1β、TNF-α）、促炎介質(zhì)（PGE2）含量，Western Blot檢測COX-2和 iNOS

4、蛋白表達(dá)水平。試驗(yàn)結(jié)果表明：BNGP在62.5-500μg/mL濃度范圍內(nèi)能提高正常狀態(tài)的RAW264.7巨噬細(xì)胞的代謝活力，增加NO、IL-1β、TNF-α、PGE2的分泌量，提高COX-2和 iNOS的表達(dá)量，高濃度（>125μg/mL）能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力；當(dāng)細(xì)胞處于LPS激活狀態(tài)時(shí)，BNGP在62.5-500μg/mL濃度范圍內(nèi)能抑制 IL-1β、TNF-α、PGE2的分泌，濃度為500μg/mL時(shí)可抑制NO的產(chǎn)生及iNOS

5、的表達(dá)，高濃度（>125μg/mL）則能下調(diào)COX-2的表達(dá)。
　　3.采用流式細(xì)胞術(shù)分析BNGP對LPS-FITC與RAW264.7巨噬細(xì)胞表面受體結(jié)合的干擾作用，免疫熒光分析BNGP對NF-κB p65核轉(zhuǎn)位的影響，Western blot檢測BNGP對NF-κB p65在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核的表達(dá)，對NF-κB的抑制性蛋白IκB-α磷酸化的影響。結(jié)果顯示：（1）500μg/mL BNGP能極顯著減少FITC-LPS結(jié)合到巨噬細(xì)胞上

6、的量。（2）62.5-500μg/mL BNGP組的發(fā)生核轉(zhuǎn)位的細(xì)胞比例均極顯著高于對白對照組；高濃度BNGP（500μg/mL）能顯著減少由 LPS誘導(dǎo)發(fā)生核轉(zhuǎn)位的細(xì)胞比例，而低濃度BNGP（≤250μg/mL）則與LPS組無顯著差異。（3）BNGP單獨(dú)作用于細(xì)胞時(shí)，可劑量依賴性地激活NF-κB從胞質(zhì)轉(zhuǎn)移入核；BNGP與LPS共同作用時(shí)，能夠弱化由 LPS刺激細(xì)胞引起的NF-κB劇烈的核轉(zhuǎn)位現(xiàn)象。（4）BNGP能促使細(xì)胞質(zhì)中與NF-κ