小麥麩皮多糖對(duì)巨噬細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、小麥?zhǔn)鞘澜缟献钤缭耘嗟霓r(nóng)作物之一屬禾本科單子葉植物綱植物。已有文獻(xiàn)報(bào)道小麥麩皮中含有的膳食纖維具有降血糖、降低血清膽固醇、預(yù)防便秘、調(diào)節(jié)血糖水平及免疫調(diào)節(jié)的生理功能，但關(guān)于小麥麩皮多糖在細(xì)胞分子水平的免疫調(diào)節(jié)作用及機(jī)制鮮有報(bào)道。本文以小麥麩皮（淮麥33）為實(shí)驗(yàn)材料，首先研究不同提取方法對(duì)小麥麩皮多糖提取率、提取后麩皮殘?jiān)⒂^形態(tài)、糖醛酸含量、硫酸根含量、蛋白質(zhì)含量、單糖組成及免疫調(diào)節(jié)活性的影響;其次，通過體外實(shí)驗(yàn)研究小麥麩皮多糖對(duì)巨噬細(xì)

2、胞RAW264.7細(xì)胞毒性、分泌細(xì)胞因子NO、PGE2、TNF-α水平等細(xì)胞活性的變化，驗(yàn)證其免疫調(diào)節(jié)作用及從小麥麩皮多糖在RAW264.7細(xì)胞中引起iNOS、COX-2、TNF-α的mRNA表達(dá)量及其蛋白表達(dá)情況的變化來探究可能的活化分子機(jī)制，并通過建立免疫抑制小鼠模型，小麥麩皮多糖灌胃小鼠，用ELISA試劑盒法檢測(cè)IL-2及IFN-γ的分泌水平，測(cè)定小鼠脾臟和胸腺指數(shù)，探討小麥麩皮多糖對(duì)免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。最后，利用DEAE

3、-52纖維素柱層析及葡聚糖凝膠G-100柱層析對(duì)初步純化的小麥麩皮多糖進(jìn)一步純化分級(jí);同時(shí)，通過高效液相色譜(HPLC)和氣相色譜分析(GC)測(cè)定純化后小麥麩皮多糖的分子量大小及其單糖的組成、物質(zhì)的量之比;利用紅外光譜對(duì)小麥麩皮多糖初步結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析，研究小麥麩皮多糖結(jié)構(gòu)與其藥理活性之間的關(guān)系。
　　主要研究結(jié)果如下:
　　(1)不同提取方法提取的小麥麩皮多糖，堿提法獲得的粗多糖得率最高為31.73％，其含量為57.79％;糖

4、醛酸和硫酸根的含量依次為:堿提法＞酶提法＞酸提法＞水提法;四種提取方法所得小麥麩皮多糖均由阿拉伯糖、木聚糖及葡萄糖組成;MTT法檢測(cè)四種方法所得小麥麩皮多糖對(duì)細(xì)胞均無毒性，其中水提法獲得的多糖能顯著促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞分泌NO因子并能促進(jìn)細(xì)胞iNOS和COX-2蛋白的表達(dá)。
　　(2)體外實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明:小麥麩皮多糖對(duì)巨噬細(xì)胞RAW264.7無毒性作用，且小麥麩皮多糖可通過調(diào)節(jié)NF-κB、AP-1、p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

5、促進(jìn)巨噬細(xì)胞的免疫功能。此外，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:小麥麩皮多糖能夠增強(qiáng)環(huán)磷酰胺所致免疫低下小鼠的胸腺和脾臟器官指數(shù)，并上調(diào)細(xì)胞因子的分泌水平。
　　(3)小麥麩皮水溶性粗多糖經(jīng)分離純化后得到3個(gè)組分CWBP-l、CWBP-2、CWBP-3;通過HPLC測(cè)得純化后小麥麩皮多糖的3個(gè)組分的平均分子量大小分別是182.73 kDa、90.104 kDa、40.721 kDa; GC測(cè)得小麥麩皮多糖3個(gè)組分均由阿拉伯糖和木糖組成，其摩爾質(zhì)量