硫化氫對(duì)抗β-淀粉樣多肽誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡及其作用機(jī)制.pdf

1、目的 探討硫化氫 (hydrogen sulfide，H<,2>S) 對(duì)抗β-淀粉樣多肽 (β-amyloid) 誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制。 方法 應(yīng)用硫化氫鈉 (sodium hydrosulfide，NaHS) 作為H<,2>S的供體，甲氮甲唑藍(lán)(MTT) 法檢測細(xì)胞存活率，碘化丙啶 (PI) 染色流式細(xì)胞技術(shù) (FCM) 檢測細(xì)胞凋亡率，Hoechst 染色檢測細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化，羅丹明123(

2、 Rhodamine123，Rh123)染色 FCM 檢測細(xì)胞線粒體膜電位( mitochondrialmembrane potential，MMP)，雙氫羅丹明123(Dihydrorhodamine 123，DHR) 染色FCM檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species，ROS)的含量。 結(jié)果 (1) 5μmol/L～80 μmol/L的Aβ<,25-35>呈濃度依賴性地降低PC12細(xì)胞的存活率

3、；(2) Aβ<,25-35>能明顯地誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡，增加細(xì)胞凋亡率； (3) Aβ<,25-35>能明顯地抑制PC12細(xì)胞的線粒體膜電位(MMP)； (4) Aβ<,25-35>能顯著地增加PC12細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)生成； (5) 50μmol/L～200 μmol/L NaHS 本身不損傷PC12細(xì)胞，但能明顯地減弱Aβ<,25-35>對(duì)PC12細(xì)胞的毒性作用，提高PC12細(xì)胞的存活率； (

4、6) NaHS (20 μmol/L 和 40 μmol/L)能明顯地抑制Aβ<,25-35>的致細(xì)胞凋亡作用，降低PC12細(xì)胞的凋亡率； (7) NaHS (100μmol/L)本身不影響PC12細(xì)胞MMP值，但當(dāng)其與20μmol/L Aβ<,25-35>共同作用6h后，NaHS能顯著地降低Aβ<,25-35>引起的MMP降低； (8) 100 μmol/L NaHS自身不影響PC12細(xì)胞胞內(nèi)ROS水平，但能明顯地抑制

5、Aβ<,25-35>促進(jìn)PC12細(xì)胞ROS生成； (9) 在應(yīng)用 NaHS 與Aβ<,25-35>作用PC12細(xì)胞之前30min，應(yīng)用ATP敏感鉀通道(K<,ATP>) 抑制劑 Glybenclamide (Gly) (10 μmol/L)對(duì)PC12細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理(pretrearment)，能明顯地部分地對(duì)抗NaHS的細(xì)胞保護(hù)作用，使PC12細(xì)胞的存活率降低，細(xì)胞凋亡率增加； (10) Gly (10 μmol/L)預(yù)

6、處理能部分地顯著地拮抗NaHS對(duì)PC12細(xì)胞MMP的保護(hù)作用及抑制ROS生成作用。 結(jié)論 1、Aβ<,25-35>能明顯地?fù)p傷PC12細(xì)胞，使細(xì)胞存活率降低，細(xì)胞凋亡率增加；并能使PC12細(xì)胞MMP降低及ROS生成增多，提示Aβ<,25-35>對(duì)細(xì)胞的損傷作用可能與其降低MMP及增加胞內(nèi)ROS生成有關(guān)； 2、NaHS能明顯對(duì)抗Aβ<,25-35>對(duì)PC12細(xì)胞的損傷作用，此細(xì)胞保護(hù)作用可能與NaHS保護(hù)PC12細(xì)