血管緊張素-(1-7)對THP-1細胞基質金屬蛋白酶-9與CD40-CD40L表達的影響.pdf

1、背景： 動脈粥樣硬化(atheroselerosis，AS)的發(fā)病過程十分復雜，其發(fā)病機制一直是人們研究的熱點。大量的研究資料顯示，免疫與炎癥反應在動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用。急性冠脈綜合癥(ACS)是一種伴有斑塊破裂和血栓形成的急性炎癥?；|金屬蛋白酶-9(MMP-9)能特異性地與細胞外基質各成分相結合，并降解胞外基質，多數學者認為MMP-9在臨床上可以作為斑塊的活動性標志。大量研究證實，CD40-CD40配

2、體通路幾乎貫穿AS發(fā)生發(fā)展乃至斑塊破裂的全過程，CD40-CD40L的相互作用可產生一系列的免疫炎性反應，包括促進粘附分子、細胞因子和基質會屬蛋白酶等物質的產生，從而促進As的慢性炎癥過程和急性冠脈綜合征發(fā)生。血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)是腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)的重要生物活性肽。研究表明，AngⅡ可同時促進MMP-9和CD40-CD40L的表達。血管緊素-(1-7)(angiotensin-1-7，Ang-

3、1-7)是RAS的新成員，具有利鈉利尿、降血壓、抗增生等拮抗AngⅡ的作用。 目的： 本研究旨在體外觀察Ang-(1-7)對人單核/巨噬細胞(THP-1細胞)MMP-9的表達是否存在抑制作用及其作用是否與CD40-CD40L信號通路有關，揭示Ang-(1-7)拮抗AngⅡ促炎作用的可能機制。 方法： 1、THP-1源性巨噬細胞培養(yǎng)及誘導分化。 2、試驗分組及方法：(1)對照組，培養(yǎng)液不加干擾因素；

4、(2)AngⅡ組，加入AngⅡ1000nmol/L作用24h；(3)-(5)組[Ang-(1-7)+AngⅡ組]，分別加入Ang-(1-7)10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L，30min后再加入AngⅡ1000nmol/L作用24h；(6)A-779+Ang-(1-7)+AngⅡ組，先加入Ang-(1-7)受體拮抗劑A-17910000nmol/L30min，再加Ang-(1-7)100nmol/L30min，最

5、后加入終濃度為1000nmol/L AngⅡ作用24h。本實驗用應用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法檢測MMP-9和CD40、CD40L的表達，再應用流式細胞儀檢測CD40、CD40L，揭示Ang-(1-7)抗炎作用的可能機制。 結果： 1、正常細胞生長良好，單核細胞呈圓型、懸浮生長，誘導轉化時加入佛波酯100nmol/L，誘導分化48h細胞變?yōu)橘N壁生長，形態(tài)不規(guī)則，伸出偽足。 2、與對照組比較，1000n

6、mol/L AngⅡ作用于培養(yǎng)的巨噬細胞，MMP-9、CD40/CD40LmRNA的表達顯著升高，巨噬細胞上CD40、CD40L高表達(P＜0.05)； 3、與AngⅡ組比較，隨著Ang-(1-7)濃度增加(10、100、1000nmol/L)，Ang-(1-7)+AngⅡ組MMP-9、CD40/CD40LmRNA表達逐漸減少，巨噬細胞上CD40、CD40L的表達量逐漸下降，其作用呈濃度依賴性，(P＜0.05)。 4、與

7、AngⅡ組比較，A-779+Ang-(1-7)+AngⅡ組在先應用Ang-(1-7)特異性阻斷劑A-779后MMP-9、CD40和CD40LmRNA表達及巨噬細胞上CD40、CD40L的表達量再次升高，與AngⅡ刺激組比較無顯著差別。(P＞0.05) 結論： 1、AngⅡ可使THP-1巨噬細胞MMP-9、CD40和CD40L表達明顯增加。 2、Ang-(1-7)可以拮抗AngⅡ誘導的THP-1巨噬細胞MMP-9、