白藜蘆醇對TNF-α誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞CD40-CD40L表達(dá)及基質(zhì)金屬蛋白酶-9活性的影響.pdf

1、目的：從細(xì)胞水平研究白藜蘆醇(Resveratrol，Res)對體外TNF-α誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)CD40-CD40L表達(dá)及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)活性的影響，并探討白藜蘆醇抗動脈硬化作用可能的分子機(jī)制。 方法：采用體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVEC)2-3代用于實(shí)驗(yàn)研究，HUVEC隨機(jī)分6組： (1).空白對照組。 (2).TNF-α組(不同濃度、不同時(shí)間各4個(gè)亞組)： (

2、3).白藜蘆醇組。 (4).“不同濃度白藜蘆醇+TNF-α”組(3個(gè)不同濃度亞組)。 (5).Res溶媒DMSO組。 (6).“抗CD40抗體+TNF-α”組。分別予TNF-α和白藜蘆醇進(jìn)行細(xì)胞干預(yù)后，顯微鏡下觀察細(xì)胞大體形態(tài)的改變，用流式細(xì)胞術(shù)檢測HUVEC表面CD40-CD40L分子的表達(dá)，用明膠酶譜法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MMP-9的表達(dá)活性，從細(xì)胞水平研究白藜蘆醇對體外TNF-α誘導(dǎo)HUVEc的CD40-C

3、D40L表達(dá)及MMP-9活性的影響，并探討白藜蘆醇抗動脈硬化作用可能的分子機(jī)制。 結(jié)果： (1).HUVEC經(jīng)TNF-α刺激后，可見不同程度細(xì)胞損傷，表現(xiàn)為細(xì)胞壞死脫落，殘余細(xì)胞形態(tài)腫脹、排列稀疏，呈時(shí)間和濃度相關(guān)性。而經(jīng)白黎蘆醇預(yù)孵育的HUVEC只有少量細(xì)胞壞死脫落，殘余細(xì)胞形態(tài)良好，排列規(guī)整。可見白黎蘆醇對TNF-α損傷的HUVEC具有保護(hù)作用。 (2).經(jīng)不同濃度TNF-α(1μg/L，10 μg/L)組均

4、刺激24h后及不同時(shí)間(12h，24h)組的TNF-α(均10μg/L)作用后，流式細(xì)胞術(shù)檢測HUVEC表達(dá)CD40-CD40L平均熒光強(qiáng)度，均較對照組HUVEC明顯升高(P＜0.05和P＜0.01)。TNF-α刺激HUVEC上CD40-CD40L的表達(dá)在一定范圍呈時(shí)間(0 h，1 h，12 h，24 h)和濃度(0 μg/L，0.1μ g/L，1μg/L，10μg/L)依賴性。 (3).給與1μ mol/L和10μ mol/L

5、濃度的白黎蘆醇預(yù)孵育的HUVEC，在經(jīng)過TNF—α刺激后，其表面CD40及CD40L分子的表達(dá)明顯少于單用TNF-α刺激(TNF-α組)時(shí)的表達(dá)(P＜0.01)。而單用白黎蘆醇組或DMSO組對HUVEC表面CD40及CD40L分子的表達(dá)較對照組無明顯改變(P＞0.05)。白黎蘆醇在0.1 μmol/L，1μ mol/L，10 pμmol/L范圍內(nèi)可呈濃度依賴性的抑CD40-CD40L的表達(dá)。 (4).在TNF—α組經(jīng)過TNF—α

6、刺激后，明膠酶譜法檢測HUVEC培養(yǎng)液中MMP-9的表達(dá)活性較對照組HUVEC明顯升高(P＜0.01)，而在“抗CD40抗體+TNF-α”組，預(yù)先加入抗CD40抗體后再加入TNF-α刺激，HUVEC培養(yǎng)液中MMP-9的表達(dá)活性較單用TNF—α組HUVEC明顯下降(P＜0.01)，表明通過CD40-CD40L信號作用途徑，TNF-α可增加HUVEC培養(yǎng)液中MMP-9的表達(dá)活性，并為抗CD40抗體所拮抗。 (5).在“不同濃度白藜蘆

7、醇+TNF—α”組，經(jīng)不同濃度白黎蘆醇(1 μmol/L和10μmol/L)預(yù)孵育的HUVEC，在經(jīng)過TNF—α刺激后，其HUVEC培養(yǎng)液中MMP-9的表達(dá)活性較單用TNF—α刺激時(shí)明顯下降(P＜0.01)，白黎蘆醇在0.1μmol/L，1μ mol/L，10μmol/L范圍內(nèi)可呈濃度依賴性的抑制TNF-α誘導(dǎo)MMP-9的表達(dá)活性，表明白黎蘆醇可抑制TNF-α經(jīng)由CD40-CD40L信號作用途徑誘導(dǎo)上調(diào)MMP-9表達(dá)活性。 結(jié)論

8、： (1).TNF-α可誘導(dǎo)HUVEC表面CD40-CD40L分子表達(dá)增加，并在一定范圍內(nèi)呈時(shí)間和濃度依賴性。 (2).TNF-α可通過CD40-CD40L信號作用途徑增加HUVEC培養(yǎng)液中MMP-9的表達(dá)活性，并被抗CD40抗體所拮抗。 (3).白藜蘆醇可減少TNF-α誘導(dǎo)上調(diào)的HUVEC表面CD40-CD40L的表達(dá)，并可抑制TNF-α通過CD40-CD40L信號作用途徑上調(diào)的HUVEC MMP-9的表達(dá)活性