獨(dú)活寄生合劑對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠IL-1、IL-10、TNF-α的影響.pdf

1、目的：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種以慢性、進(jìn)行性、對(duì)稱性、多關(guān)節(jié)炎為臨床表現(xiàn)的自身免疫性疾病，最后可導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨和骨破壞。病理特征為炎癥細(xì)胞浸潤、滑膜增殖和血管翳形成、軟骨和骨組織的破壞。其發(fā)病機(jī)制不明。大量資料表明，淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和增生的滑膜細(xì)胞在發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。尤其是這些細(xì)胞所釋放的大量細(xì)胞因子在RA的發(fā)病中有重要的作用。細(xì)胞因子貫穿RA的發(fā)展始終。近年來研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)失衡和RA的發(fā)病相關(guān)。既往有大量的臨床試

2、驗(yàn)證明獨(dú)活寄生湯對(duì)RA有治療作用。本課題以佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)大鼠為動(dòng)物模型，研究獨(dú)活寄生合劑(DHJS)對(duì)AA大鼠IL-1、IL-10、TNF-α血清水平以及滑膜中表達(dá)水平的影響，探討其療效以及作用機(jī)制，為其在RA的治療方面提供理論依據(jù)。 方法： (1)選擇雄性Wister大鼠在尾根部皮內(nèi)注射完全弗氏佐劑(CFA)0.1ml，建立佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠動(dòng)物模型，隨機(jī)取10只相同部位注射等量的生理鹽水作為正常對(duì)照。 (

3、2)注射后第18天，出現(xiàn)二次反應(yīng)的大鼠隨機(jī)分為模型組、甲氨喋呤組(MTX組)、獨(dú)活寄生合劑組、甲氨喋呤聯(lián)合獨(dú)活寄生合劑組，每組10只，注射生理鹽水大鼠作為正常對(duì)照組。 (3)測(cè)量大鼠足爪容積、體重后，各治療組大鼠連續(xù)給藥14天。治療結(jié)束后第二天，測(cè)量大鼠足爪容積、體重，評(píng)價(jià)關(guān)節(jié)炎指數(shù)和一般狀態(tài)后，在3％苯巴比妥鈉腹腔注射麻醉下腹主動(dòng)脈取血分離血清備用。 (4)用放射免疫的方法檢測(cè)血清IL-1、IL-10、TNF-α水平。

4、 (5)顯微鏡下觀察踝關(guān)節(jié)滑膜病理改變，評(píng)價(jià)軟骨損傷程度，記錄病理積分。 (6)用免疫組化的方法檢測(cè)IL-1、IL-10、TNF-α在滑膜中的表達(dá)，采用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)對(duì)其表達(dá)進(jìn)行半定量分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)采用SPSS 11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果用-x±s表示。各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。 結(jié)果： 1.和模型組比較，獨(dú)活寄生合劑組、甲氨喋呤組、甲氨喋呤聯(lián)合獨(dú)活寄生合劑組能顯著改善大鼠的

5、一般狀況。模型成功建立后，模型組體重和其他三個(gè)藥物干預(yù)治療組明顯低于正常對(duì)照組。試驗(yàn)結(jié)束后，獨(dú)活寄生合劑組、甲氨喋呤組、甲氨喋呤聯(lián)合獨(dú)活寄生合劑組和模型組體重仍然低于正常對(duì)照組。MTX組體重低于聯(lián)合用藥組，獨(dú)活寄生合劑組和MTX組比較無顯著性差異。差值比較：模型對(duì)照組的體重增長明顯低于其他三個(gè)試驗(yàn)組。獨(dú)活寄生合劑組和MTX組比較體重增長無顯著性差異，MTX聯(lián)合獨(dú)活寄生合劑組較MTX組體重增長明顯，比較差異具有顯著性。 2.模型建

6、立后，正常對(duì)照組之外的各組的關(guān)節(jié)炎指數(shù)和足爪腫脹度無明顯差異。治療結(jié)束后，每個(gè)治療組的關(guān)節(jié)炎指數(shù)和足爪腫脹度明顯降低。聯(lián)合用藥組改善最明顯。MTX組和獨(dú)活寄生合劑組比較無顯著性差異。 3.模型對(duì)照組血清中IL-1、TNF-α明顯高于正常對(duì)照組，而IL-10水平明顯低于正常對(duì)照組。治療結(jié)束后，和模型對(duì)照組比較，各治療組血清中IL-1、TNF-α水平明顯下降，IL-10水平明顯增高。MTX聯(lián)合獨(dú)活寄生合劑組IL-1、TNF-α水平顯

7、著低于MTX組，差異具有顯著性，而獨(dú)活寄生合劑組血清IL-1、TNF-α水平明顯高于MTX組，差異有顯著性。MTX組和獨(dú)活寄生合劑組血清IL-10水平比較差異無顯著性。聯(lián)合用藥組IL-10水平較MTX組明顯增高，兩組比較差異顯著。 4.模型對(duì)照組中，滑膜組織中有大量的淋巴細(xì)胞浸潤，滑膜細(xì)胞增殖，血管翳形成，軟骨和骨質(zhì)破壞。各治療組在治療結(jié)束后病理表現(xiàn)均有不同程度的改善。MTX組與獨(dú)活寄生合劑組病理積分比較差異無顯著性。聯(lián)合用藥組

8、改善最明顯。 5.免疫組化的情況：模型對(duì)照組中IL-1、TNF-α滑膜組織的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，而IL-10的表達(dá)明顯低于正常對(duì)照組。治療結(jié)束后，三個(gè)藥物干預(yù)組IL-1、TNF-α的表達(dá)明顯低于模型對(duì)照組。MTX聯(lián)合獨(dú)活寄生合劑組IL-1、TNF-α的表達(dá)水平最低。IL-10在藥物干預(yù)組中的表達(dá)明顯高于模型組，聯(lián)合用藥組在各藥物干預(yù)組中IL-10的組織表達(dá)水平最高。 6.血清中IL-1、IL-10、TNF-α表達(dá)水平

9、和滑膜組織中IL-1、IL-10、TNF-α表達(dá)水平呈正相關(guān)。 結(jié)論： 1.試驗(yàn)結(jié)果顯示，獨(dú)活寄生合劑治療大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎有顯著療效，能明顯降低大鼠的足爪腫脹度，減輕關(guān)節(jié)炎病變損傷積分，降低血清中IL-1、TNF-α水平，提高血清中IL-10的水平。獨(dú)活寄生合劑能減少滑膜組織中IL-1、TNF-α的表達(dá)水平，增加IL-10的表達(dá)水平。獨(dú)活寄生合劑聯(lián)合甲氨喋呤療效優(yōu)于單獨(dú)用藥，證實(shí)中藥有效成分與西藥配伍具有協(xié)同作用，能顯著