丹參酮Ⅱa對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清IL-1、IL-6、TNF-α水平及滑膜MMP3-TIMP1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一病因未明的系統(tǒng)性疾病，特點(diǎn)是慢性、多關(guān)節(jié)炎癥，最后導(dǎo)致軟骨和骨的破壞。其主要病理特點(diǎn)是滑膜細(xì)胞增生、襯里層增厚、多種炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、血管翳形成，以及軟骨和骨組織的破壞。近年來(lái)的研究表明，RA的軟骨破壞與細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失調(diào)及軟骨基質(zhì)的降解有密切的關(guān)系。目前主要的治療方法為早期應(yīng)用免疫抑制劑來(lái)抑制關(guān)節(jié)的骨破壞，控制病情發(fā)展。臨床上應(yīng)用丹參酮IIa治療RA取得了較好的療效。本

2、文旨在成功建立佐劑性關(guān)節(jié)炎(Adjuvant Arthritis，AA)模型的基礎(chǔ)上觀察丹參酮IIa對(duì)大鼠關(guān)節(jié)炎的治療效果，并檢測(cè)其對(duì)模型鼠血清白介素-1(interleukin-1，IL-1)、白介素一6(interleukin-6，IL-6)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factorα、TNF-α)水平及滑膜基質(zhì)金屬蛋白酶3(Matrix metalloproteinase 3，MMP3)和組織金屬蛋白酶抑制物1(T

3、issue inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP1)表達(dá)的影響，并探討其作用機(jī)制。 方法： (1)選取50只Wistar雄性大鼠，隨機(jī)分為五組：正常組、模型組、丹參酮IIa組、來(lái)氟米特組、配伍組(丹參酮IIa+來(lái)氟米特)。除正常對(duì)照組外，每組大鼠右足皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑0.1ml制作關(guān)節(jié)炎模型。 (2)在造模后第18天，除模型組外，各用藥組分別連續(xù)給藥14天，在造模及用藥前后

4、觀察大鼠的一般情況，并記錄體重；根據(jù)排水法原理用容積測(cè)量?jī)x測(cè)量大鼠后足體積，并記錄關(guān)節(jié)炎指數(shù)，觀察藥物對(duì)繼發(fā)病變的治療作用。 (3)用放射免疫法測(cè)定IL-1、IL-6、TNF-α水平。 (4)采血后摘取踝關(guān)節(jié)進(jìn)行固定、脫鈣、石蠟包埋，HE染色，光鏡下觀察關(guān)節(jié)病理變化，并進(jìn)行評(píng)分。 (5)無(wú)菌取出踝關(guān)節(jié)處的滑膜組織，應(yīng)用免疫組化檢測(cè)滑膜組織中的MMP3及TIMP1的表達(dá)，并采用計(jì)算機(jī)圖像分析的方法對(duì)其表達(dá)量進(jìn)行定量

5、分析。 (6)應(yīng)用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果 1、與模型組比較，丹參酮IIa組、來(lái)氟米特組、配伍組均能改善大鼠的一般情況；配伍組給藥前后體重增加值與正常組比較，差異無(wú)顯著性(P>0.05)；與模型組比較，差異有顯著性(P<0.05)。 2、造模后18天各組大鼠之間的關(guān)節(jié)炎指數(shù)與足爪腫脹相比無(wú)明顯差異(P>0.05)；給藥后，丹參酮IIa組、來(lái)氟米特組、配伍組均能減輕大鼠的足爪腫脹和關(guān)節(jié)炎

6、指數(shù)，與模型組比較，差異顯著(P<0.05)；配伍組較來(lái)氟米特、丹參酮IIa組的作用更明顯(P<0.05)。 3、模型組的IL-1、IL-6、TNF-α水平明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01)，用藥后各組的細(xì)胞因子水平較模型組降低(P<0.05)，配伍組的降低更明顯(P<0.01)。 4、病理結(jié)果顯示：模型組大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜組織內(nèi)有大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，關(guān)節(jié)面不完整，有血管翳形成；治療后，滑膜組織內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕，軟骨破

7、壞程度減弱。與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠踝關(guān)節(jié)的病變積分顯著增高(P<0.01)；各用藥組的大鼠關(guān)節(jié)病變積分與模型組比較，皆明顯下降(P<0.05)，三個(gè)用藥組之間比較，配伍組的關(guān)節(jié)病變積分最低。 5、免疫組化定量分析，模型組大鼠滑膜組織MMP3表達(dá)陽(yáng)性密度顯著高于正常對(duì)照組(P<0.01)；與模型組比較，各用藥組的MMP3表達(dá)陽(yáng)性密度均降低(P<0.01)；配伍組的表達(dá)陽(yáng)性密度與單一用藥組比較，差異顯著(P<0.05)。與正常

8、對(duì)照組比較，模型組大鼠滑膜組織TIMP-1的表達(dá)陽(yáng)性密度明顯降低(P<0.05)。各用藥組的TIMP-1表達(dá)陽(yáng)性密度均明顯高于模型組。配伍組的表達(dá)密度與單一用藥組比較有差異(P<0.05)。 6、IL-1、病理積分與MMP3的相關(guān)性分析本實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論：(1)IL-1與MMP3水平之間成正相關(guān) (r=0.9051，p=0.0001)；(2)病理積分與MMP3水平之間成正相關(guān)(r=0.8961，p=0.0001).這說(shuō)明MMP3在R

9、A的軟骨破壞中起著重要的作用。IL-1是MMP3的重要調(diào)節(jié)因素。丹參酮IIa能夠抑制血小板凝聚，影響IL-1的分泌，減少了IL-1對(duì)滑膜和軟骨的刺激，使MMP3對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的降解減輕，從而減弱了RA的軟骨破壞。 結(jié)論： 1、丹參酮IIa治療佐劑性關(guān)節(jié)炎具有顯著療效，能夠明顯減輕大鼠的足爪腫脹，降低血清IL-1、IL-6、TNF-α水平；減輕關(guān)節(jié)的病變損傷積分，減少滑膜組織中MMP3的表達(dá)，增加TIMP1的表達(dá)。配伍組的效

10、果優(yōu)于丹參酮IIa、來(lái)氟米特組，證實(shí)了中藥有效成分與西藥配伍應(yīng)用在實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎中的增效作用。 2、丹參酮IIa治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的可能機(jī)制： (1)丹參酮IIa通過(guò)改善血循環(huán)，抑制血小板凝聚，減少血清炎性細(xì)胞因子的分泌。 (2)通過(guò)減少細(xì)胞因子IL-1、IL-6、TNF-α的分泌，減輕其對(duì)滑膜組織和軟骨組織的刺激，抑制從大鼠滑膜組織MMP3的過(guò)度表達(dá)，調(diào)整MMP3/TIMP1的失衡，從而減輕關(guān)節(jié)炎的癥狀和軟骨破壞。