白芍總苷對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血漿及滑膜組織IL-1β、IFN-γ的影響.pdf

1、目的：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種慢性系統(tǒng)性自身免疫性疾病。以關(guān)節(jié)滑膜炎，對(duì)稱性、破壞性關(guān)節(jié)病變?yōu)橹饕卣?。病情逐步進(jìn)展，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)功能障礙。其致病原因尚不完全明確，多種炎性細(xì)胞及細(xì)胞因子介導(dǎo)的異常細(xì)胞免疫、體液免疫而致的全身及關(guān)節(jié)局部免疫功能紊亂，在RA的致病過(guò)程中起著重要的作用。目前，改善癥狀、減慢疾病進(jìn)展的抗風(fēng)濕藥是RA的主要治療手段。但其毒副作用較大，而針對(duì)某些細(xì)胞因子的生物制劑價(jià)格昂貴

2、，導(dǎo)致患者長(zhǎng)期服用依從性差，不利于疾病控制，因此選擇一種效價(jià)比良好的抗風(fēng)濕藥物勢(shì)在必行。白芍總苷(totalglucosides of paeony，TGP)為中藥制劑，自古以來(lái)就是風(fēng)濕免疫性疾病治療的重要組方之一。其作用溫和，不僅具有抗炎、調(diào)節(jié)免疫力的作用，還具有鎮(zhèn)痛，保肝的功效，已用于風(fēng)濕性疾病的臨床治療，但其劑量及療效不是很確切。本實(shí)驗(yàn)以完全弗氏佐劑所誘導(dǎo)的佐劑性關(guān)節(jié)炎(adiuvant arthritis，AA)大鼠模型為基礎(chǔ)，

3、從體重、關(guān)節(jié)腫脹程度、血漿及滑膜組織白細(xì)胞介素-1 β(interleukin-1β，IL-1 β)，干擾素-γ(interferon-γ，IFN-γ)水平的變化等幾方面，觀察不同濃度的白芍總苷對(duì)關(guān)節(jié)炎的影響，探討白芍總苷治療RA的機(jī)制。 方法：(1)將成年雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為Ⅰ組(正常對(duì)照組)、Ⅱ組(單純?cè)炷＝M)、Ⅲ組(造模+低劑量白芍總苷組)、Ⅳ組(造模+高劑量白芍總苷組)、Ⅴ組(造模+甲氨喋呤組)。Ⅱ-Ⅴ組每只大鼠

4、尾根部皮內(nèi)多點(diǎn)注射完全弗氏佐劑(CFA)0.2ml，誘導(dǎo)出關(guān)節(jié)炎模型，14天后再次注射0.1ml加強(qiáng)免疫。(2)從免疫后第12天開(kāi)始Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組分別給予白芍總苷50mg/kg·d，300mg/kg·d，甲氨喋呤2.7mg/kg·w灌胃治療，Ⅰ組、Ⅱ組給與等體積生理鹽水灌胃。(3)測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠的體重、足體積、并進(jìn)行關(guān)節(jié)炎指數(shù)(AI)的評(píng)定。(4)采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定給藥14天(造模26天)及給藥28天(造模40天)

5、各組大鼠血漿IL-1β、IFN-γ濃度。(5)對(duì)給藥14天和給藥28天的各組大鼠滑膜組織進(jìn)行IL-1β、IFN-γ的SP免疫組織化學(xué)染色，采用真彩病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析。(6)應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果：(1)AI：第Ⅱ-Ⅴ組大鼠造模15天后各時(shí)間點(diǎn)AI均高于第Ⅰ組，高峰出現(xiàn)在造模后20-25天，以后逐漸下降；Ⅲ組、Ⅳ組于造模后25天AI低于第Ⅱ組，Ⅴ組于造模后30天AI低于第Ⅱ組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

6、＜0.05)；Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組各時(shí)間點(diǎn)之間AI值無(wú)差別(P＞0.05)。(2)足體積的測(cè)量：實(shí)驗(yàn)前各組大鼠之間足體積無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。第Ⅱ-Ⅴ組大鼠足體積于造模后15天明顯高于正常組(P＜0.05)，第20-25天達(dá)到腫脹高峰，之后腫脹程度逐漸下降，直到40天仍高于正常組(P＜0.05)。第Ⅲ組、Ⅳ組于造模后20天出現(xiàn)療效，足體積低于第Ⅱ組，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，較第Ⅴ組出現(xiàn)療效早5天。第Ⅴ組于造模后25天出現(xiàn)療

7、效，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(3)血漿IL-1β、IFN-γ濃度：給藥14天時(shí)，第II-V組兩種細(xì)胞因子濃度均明顯高于第I組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；給藥28天時(shí)，第II-V組的兩種細(xì)胞因子濃度都較前下降，II組、III組仍高于正常(P＜0.05)，Ⅳ組、V組則降至正常，與正常組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。給藥14天及28天，III組、Ⅳ組、V組的兩種細(xì)胞因子濃度均低于模型組(P＜0.05)。給藥14天，

8、III組、Ⅳ組、V組兩兩之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，以第Ⅳ組細(xì)胞因子濃度最低，其次為第III組，第V組最高；至給藥28天，第Ⅳ組、V組細(xì)胞因子濃度最低，低于第III組(P＜0.05)，Ⅳ組、V組之間無(wú)差別(P＞0.05)。(4)滑膜組織IL-1 β、IFN-γ的積分光密度值(IOD)：給藥14天時(shí)，第II-V組兩種細(xì)胞因子的IOD值均明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05)；至給藥28天，II-V組細(xì)胞因子的IOD值都較前下降，但都未降

9、至正常，與正常組比較仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。給藥14天及28天兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，III組、Ⅳ組、V組兩種細(xì)胞因子的IOD值都低于模型組(P＜0.05)。給藥14天，III組、Ⅳ組、V組兩兩之間有差別，以第Ⅳ組IOD值最低，其次為第III組，第V組最高；給藥28天，第Ⅳ組、V組細(xì)胞因子水平低于第III組(P＜0.05)，Ⅳ組、V組之間無(wú)差別(P＞0.05)。(5)相關(guān)性分析：AI與足體積呈直線正相關(guān)；血漿中IL-1 β、IFN-γ濃度呈

10、直線正相關(guān)，同時(shí)二者分別與足體積呈直線正相關(guān)；滑膜組織的IL-1 β、IFN-γ的IOD值呈直線正相關(guān)，同時(shí)二者分別與足體積呈直線正相關(guān)。結(jié)論：(1)AI與足體積呈直線正相關(guān)，二者均能反映關(guān)節(jié)腫脹情況，但后者方法更為精確、客觀。二者結(jié)合能更直觀、準(zhǔn)確的反映關(guān)節(jié)腫脹程度。(2)血漿及滑膜中的IL-1β、IFN-γ水平分別與足體積呈直線正相關(guān)，提示IL-1β、IFN-γ在RA致病過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。(3)血漿及滑膜中的IL-1β、IFN

11、-γ水平之間分別呈直線正相關(guān)，二者互相影響，在RA致病過(guò)程中形成相互影響的惡性循環(huán)。(4)白芍總苷具有較好的抗炎作用，可以降低血清IL-1 β、IFN-γ的含量，減輕癥狀。(5)白芍總苷可以降低滑膜IL-1β、IFN-γ的水平，減輕滑膜細(xì)胞水腫、減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、抑制滑膜增生，從而達(dá)到減輕關(guān)節(jié)腫脹、抑制骨破壞、延緩病程的目的。(6)白芍總苷起效早于甲氨喋呤。藥物治療14天，白芍總苷療效較甲氨喋呤為好；藥物治療28天，大劑量白芍總苷的療效