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文檔簡介
1、瘢痕疙瘩(keloid)是一種人類特有的由皮膚創(chuàng)傷引發(fā)的疾病,因其發(fā)病機(jī)理不明,目前尚無特效的治療方法。鑒于瘢痕疙瘩浸潤性生長且極易復(fù)發(fā)的特性與腫瘤非常相似,且瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞體外增殖旺盛、缺乏接觸抑制、極少凋亡等特性也類似于腫瘤細(xì)胞,故而瘢痕疙瘩已被認(rèn)為是一種皮膚的良性腫瘤。腫瘤細(xì)胞耐藥性及腫瘤干細(xì)胞一直是近年來腫瘤研究領(lǐng)域的兩大熱點(diǎn)。那么瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞(keloid fibroblasts,KFs)是否具有對抗腫瘤藥物的耐受性
2、?KFs中是否含有干細(xì)胞?其耐藥性和干細(xì)胞之間是否存在某種關(guān)聯(lián)?所有這些問題目前尚未見相關(guān)報道。本研究圍繞這三個問題,通過與正常皮膚成纖維細(xì)胞(normal fibroblasts,NFs)的對比,系統(tǒng)地研究了KFs的上述特性。
首先,我們對兩種細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),加入與耐藥膜泵蛋白相關(guān)的抗腫瘤藥物長春新堿和鹽酸米托葸醌以及它們的耐藥抑制劑維拉帕米,比較KFs和NFs對藥物的耐受性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)第一代KFs對抗腫瘤藥物確實(shí)具有一定的
3、耐受性,而且其耐受性能夠被維拉帕米逆轉(zhuǎn),但隨著傳代培養(yǎng),其耐藥性迅速消失。進(jìn)一步檢測發(fā)現(xiàn),KFs在第一代時耐藥相關(guān)基因MDR1、ABCB5等表達(dá)顯著高于NFs,但傳代后也迅速降低以致消失,這與傳代后耐藥性的消失過程相吻合,表明KFs的耐藥性的確與這些耐藥基因有著密切的關(guān)系。
其次,為明確KFs中是否含有干細(xì)胞,我們將KFs和NFs進(jìn)行了低密度培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)KFs的克隆形成能力明顯強(qiáng)于NFs,同時這些可以形成克隆的細(xì)胞也具有更強(qiáng)的多
4、向分化能力,包括成脂、成骨和成軟骨。進(jìn)一步的單細(xì)胞克隆分析結(jié)果表明,KFs的單細(xì)胞克隆形成率也明顯高于NFs,但兩者單細(xì)胞克隆的多向分化能力并無顯著差異,這提示我們在KFs和NFs中都存在干細(xì)胞,而KFs中的干細(xì)胞含量明顯高于NFs。
最后,為進(jìn)一步闡明干細(xì)胞與耐藥性的關(guān)系,我們對原代、低密度、單細(xì)胞克隆培養(yǎng)的KFs和NFs分別進(jìn)行了MDR1流式分析及耐藥實(shí)驗(yàn),結(jié)果證實(shí)各種條件培養(yǎng)的KFs均表達(dá)MDR1(均高于NFs),而且低
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