5-氟尿嘧啶對(duì)體外培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖和凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討5-氟尿嘧啶對(duì)體外培養(yǎng)的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖和凋亡方面的生物學(xué)影響。 方法：①成纖維細(xì)胞體外原代培養(yǎng)：手術(shù)取6例瘢痕疙瘩(Keloid，K)(耳垂、大腿各1例、胸前、上臂各2例)，均為安徽醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院整形外科手術(shù)病例，按文獻(xiàn)方法進(jìn)行成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)，待細(xì)胞融合后傳代，實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞均為處于4～8代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞(Keloid fibroblast，KF)；②將不同濃度5-氟尿嘧啶(5-fluoro

2、uracil，5-FU)(0.1，0.2，0.4，0.8，1.6g/L)對(duì)4～8代瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞分別進(jìn)行干預(yù)24h，48h，72h，采用四甲基偶氮唑鹽比色法檢測(cè)各濃度藥物對(duì)成纖維細(xì)胞的抑制率，計(jì)算5-氟尿嘧啶對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(50％Inhibifiory concentration，IC50)值。再選用不超過(guò)IC50的5個(gè)濃度：0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 g/L，作為余下實(shí)驗(yàn)濃度；③應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(Fl

3、ow cytometry，F(xiàn)CM)分析法觀察5-氟尿嘧啶干預(yù)后KF的細(xì)胞周期變化及細(xì)胞凋亡百分率；④應(yīng)用Hoechst33258熒光染色法觀察凋亡成纖維細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征；⑤應(yīng)用蛋白免疫印跡技術(shù)(Western-blot)檢測(cè)5-氟尿嘧啶對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：6例瘢痕疙瘩標(biāo)本原代培養(yǎng)成纖維細(xì)胞成活良好，均用于實(shí)驗(yàn)，進(jìn)入結(jié)果分析。①0.1，0.2，0.4，0.8，1.6 g/L 5-氟尿嘧啶分

4、別干預(yù)24h，48h，72h后，各組間KF細(xì)胞抑制率兩兩比較差異均有顯著性(P<0.01)。并采用作圖法求得三組不同干預(yù)時(shí)間下的半數(shù)抑制濃度IC50分別為(0.816±0.041)g/L， (0.637±0.028)g/L， (0.430±0.032)g/L；②0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 g/L 5-氟尿嘧啶干預(yù)48 h后，KF細(xì)胞凋亡率組間兩兩比較有差異(P<0.05)，與對(duì)照組比較，差異有顯著性意義(P<0.01)；

5、 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞周期百分?jǐn)?shù)比較，表現(xiàn)為G0/G1期停滯，S期減少，各組間兩兩比較有差異(P<0.05)；③各濃度5.氟尿嘧啶干預(yù)48 h后，Hoechst 33258熒光染色觀察KF均有不同程度核濃縮，表明KF發(fā)生了不同程度的凋亡；④經(jīng)不同濃度5-氟尿嘧啶干預(yù)KF 48 h后，實(shí)驗(yàn)組Bcl-2蛋白表達(dá)均低于對(duì)照組(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)組Bax蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組(P<0.05)。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步揭示了5-氟尿嘧啶治療