白藜蘆醇對(duì)顳葉癲癇大鼠癲癇不同發(fā)作時(shí)期海馬和皮層氨基酸類(lèi)遞質(zhì)釋放的影響.pdf

1、目的：
　　 應(yīng)用腦立體定位技術(shù)在大鼠海馬CA3中心區(qū)通過(guò)微量注射海人草酸（kainicacid，KA），建立顳葉癲癇大鼠模型，以此模型為基礎(chǔ)，從行為學(xué)和高效液相色譜分析兩個(gè)方面觀察顳葉癲癇大鼠癲癇不同發(fā)作時(shí)期癇樣發(fā)作頻率及海馬和皮層氨基酸類(lèi)遞質(zhì)釋放水平的變化，分析顳葉癲癇發(fā)生、發(fā)展過(guò)程及白藜蘆醇（resveratrol,Res）對(duì)KA誘導(dǎo)的顳葉癲癇大鼠海馬和皮層氨基酸類(lèi)遞質(zhì)釋放的影響，進(jìn)而評(píng)價(jià)其抗癲癇效果及作用機(jī)制。
　

2、　 方法：
　　 1.模型建立雄性Wistar大鼠，體重220-260克，清潔級(jí)。水合氯醛（350mg/kg，I.p.）麻醉動(dòng)物后，用腦立體定位技術(shù)在大鼠海馬CA3中心區(qū)（AP：-4.0mm，ML：-4.4mm，DV：3.8mm）緩慢注射KA2.5μl（0.4μg/μl），約10min注射完畢，留針3-5min，縫合頭皮。按Racine分級(jí)法對(duì)癲癇發(fā)作程度進(jìn)行分級(jí)，急性發(fā)作程度達(dá)Ⅳ級(jí)以上的大鼠用于下一步藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)。對(duì)照組大鼠在

3、同樣的腦區(qū)注射等量的生理鹽水。
　　 2.動(dòng)物分組按癲癇不同發(fā)作時(shí)期對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行分組，急性期（3d）、平靜期（14d）、慢性Ⅰ期（60d）及慢性Ⅱ期（60d）。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均分為：生理鹽水對(duì)照組（NS組）、癲癇模型組（KA組）、KA+Res治療組（Res組，15mg/kg/d）。急性期癲癇大鼠在首次急性大發(fā)作后即通過(guò)灌胃給藥，每天1次，持續(xù)3d；靜止期和慢性Ⅰ期癲癇大鼠在首次急性大發(fā)作后即通過(guò)灌胃給藥，每天1次，持續(xù)10d；慢性

4、Ⅱ期癲癇大鼠模型建立后飼養(yǎng)60d后再通過(guò)灌胃給藥，每天1次，持續(xù)10d。
　　 3.行為學(xué)觀察將手術(shù)后的大鼠飼養(yǎng)于裝有視頻監(jiān)控的動(dòng)物房?jī)?nèi)，自由進(jìn)食飲水，自然采光，室溫維持在23°C±1°C。每天監(jiān)控8 h，每周監(jiān)控5d，對(duì)各組大鼠進(jìn)行連續(xù)視頻監(jiān)控，從行為表現(xiàn)上統(tǒng)計(jì)癲癇不同發(fā)作時(shí)期各組大鼠癇樣發(fā)作個(gè)體數(shù)。
　　 4.高效液相色譜分析大鼠迅速斷頭，冰上取出海馬和皮層，電動(dòng)勻漿后，加3倍體積乙腈沉淀蛋白，冷凍離心，取上清，經(jīng)稀

5、釋后柱前衍生進(jìn)樣，色譜分析；根據(jù)出峰面積及氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算海馬和皮層中谷氨酸（glutamic acid，Glu）、甘氨酸（glycine，Gly）、γ-氨基丁酸（gamma-aminobutyric acid，GABA）含量。
　　 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間差異使用單因素方差分析，組內(nèi)差異使用LSD法進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，p<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果：

6、　　 1.行為學(xué)觀察顳葉癲癇大鼠模型的成功率達(dá)到97.0％（62/64）。NS 組未見(jiàn)任何形式癲癇發(fā)作；癲癇發(fā)作急性期：KA 組大鼠癇樣發(fā)作率為87.5％（7/8），Res 組大鼠癇樣發(fā)作率為75.0％（6/8）；靜止期：KA 組大鼠癇樣發(fā)作率為0（0/8），Res組大鼠癇樣發(fā)作率為0（0/8）；慢性Ⅰ期：KA 組大鼠自發(fā)發(fā)作率為87.5％（7/8），Res 組大鼠自發(fā)發(fā)作率為12.5％（1/8）；慢性Ⅱ期：KA組大鼠自發(fā)發(fā)作率約為8

7、5.7％（6/7），Res 組大鼠自發(fā)發(fā)作率約為71.4％（5/7）。
　　 2.高效液相色譜分析與NS 組大鼠相比較，癲癇發(fā)作急性期，KA 組和Res 組海馬Glu/GABA 比值均明顯升高（n=8，P<0.05），海馬Glu/Gly 及皮層Glu/GABA,Glu/Gly 比值均無(wú)明顯變化（n=8）；靜止期，KA 組和Res 組海馬和皮層Glu/GABA,Glu/Gly 比值均無(wú)明顯變化（n=8）；慢性Ⅰ期，KA 組海馬和皮

8、層Glu/GABA和Glu/Gly 比值均明顯升高（n=8，P<0.05），Res 組海馬Glu/GABA和Glu/Gly 比值明顯降低（n=8，P<0.05），而Res 組皮層Glu/GABA和Glu/Gly 比值仍表現(xiàn)明顯升高（n=8，P<0.05）；慢性Ⅱ期，KA 組和Res 組皮層Glu/GABA和Glu/Gly 比值均明顯升高（n=7，P<0.05）；海馬Glu/GABA和Glu/Gly 比值無(wú)明顯變化（n=7）。