TLR4-NF-κB通路介導(dǎo)visfatin促內(nèi)皮炎癥作用研究.pdf

1、研究背景： 動(dòng)脈粥樣硬化(artherosclerosis，AS)是引起心血管疾病的主要原因之一。目前認(rèn)為，AS的發(fā)病機(jī)制涉及多種因素如氧化、炎癥和免疫系統(tǒng)引發(fā)的全血管生物學(xué)病理改變。內(nèi)臟脂肪素(visfatin)是最新發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞因子，與先前在淋巴細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的前B細(xì)胞集落增強(qiáng)因子(pre-B cell colony-enhancing factor，PBEF)結(jié)構(gòu)一致，不僅參與代謝的調(diào)節(jié)，也是一種前致炎因子。新近研究顯示，v

2、isfatin能誘導(dǎo)內(nèi)皮功能障礙和促進(jìn)AS的發(fā)展。Toll樣受體4(toll like receptor4，TLR4)在免疫和炎癥反應(yīng)中扮演著十分重要的角色。研究顯示，TLR4能激活核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信號(hào)通路并介導(dǎo)多種脂肪細(xì)胞因子的致炎作用。因此，本實(shí)驗(yàn)旨在觀察visfatin對(duì)內(nèi)皮炎癥反應(yīng)的影響并探討其作用是否與激活TLR4-NF-κB信號(hào)通路有關(guān)。 方法： 培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮

3、細(xì)胞(HVUECs)，給與不同濃度visfatin(0.1，1，10 nM)孵育6-48 h；實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞TNF-αmRNA的表達(dá)；ELISA法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α和MCP-1的含量；電泳遷移率變更分析內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB活性；培養(yǎng)單核細(xì)胞株THP-1，計(jì)數(shù)法檢測(cè)單核-內(nèi)皮細(xì)胞黏附率。 結(jié)果： (1)Visfatin能濃度和時(shí)間依賴性增加內(nèi)皮細(xì)胞TNF-α mRNA的表達(dá)以及培養(yǎng)上清液中TNF-α和

4、MCP-1的含量。同時(shí)，visfatin能濃度依賴性增加單核-內(nèi)皮細(xì)胞黏附； (2)Visfatin(0．1-10 nM)孵育24 h能顯著上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞TLR4 mRNA的表達(dá)，且呈濃度依賴性；而且，visfatin也能呈濃度依賴性激活內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB： (3)TLR4抗體能顯著抑制visfatin(10 nM，24 h)誘導(dǎo)的NF-κB激活，TNF-α、MCP-1的增加和單核-內(nèi)皮細(xì)胞黏附率的增加。 結(jié)論：