阿霉素大鼠心臟膠原重塑中AT1受體與CaN信號通路間關(guān)系的實驗研究.pdf

1、目的: 心肌重塑是指心臟在各種外界因素作用后出現(xiàn)的一系列組織細胞形態(tài)學的病理變化，包括心肌細胞肥大、和以間質(zhì)膠原增生、纖維化為特征的心肌間質(zhì)膠原重塑。心肌重塑是擴張型心肌病(DCM)慢性心力衰竭的主要病理學基礎(chǔ)，是心功能由代償向失代償期轉(zhuǎn)變的重要病理過程。在慢性心衰的發(fā)病機制中，腎素一血管緊張素一醛固酮系統(tǒng) (RAAS) 的過度激活是加重心肌損傷、心肌重塑、促進心衰進展的重要因素。血管緊張素Ⅱ(AngⅡ) 是RAAS的主要效應(yīng)分子，研究

2、發(fā)現(xiàn)AngⅡ可促使心肌成纖維細胞(CFs) 增殖，合成分泌膠原等細胞外基質(zhì)成分，介導(dǎo)間質(zhì)纖維化，參與心肌重塑。AngⅡ受體（AT）包括AT1和AT2，AT1受體存在于心肌細胞、血管平滑肌細胞、內(nèi)皮細胞、神經(jīng)末梢和傳導(dǎo)系統(tǒng), 介導(dǎo)血管收縮、腎臟對水的潴留、醛固酮和血管加壓素的釋放以及交感神經(jīng)的激活等反應(yīng)等所有已知的AngⅡ的心血管作用。AngⅡ通過激活心肌細胞膜AT1受體，激活多種細胞內(nèi)信息轉(zhuǎn)導(dǎo)過程, 從而促進細胞生長, 引起心肌細胞肥大

3、和間質(zhì)增生。鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)是一種受細胞內(nèi)Ca2+ 及鈣調(diào)素調(diào)節(jié)的多功能信號酶，已經(jīng)證實依賴CaN的信號通路在介導(dǎo)心肌細胞肥大反應(yīng)性基因的表達、促進心肌肥厚中起著重要作用，但對心臟CFs增殖、膠原合成、心肌膠原重塑信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用國內(nèi)外還較少研究，特別是與AT1受體間關(guān)系罕有報告，本研究借助經(jīng)典的阿霉素大鼠DCM心室重塑動物模型，研究CaN信號通路的在心室膠原重塑中的作用，及其與AT1受體間的關(guān)系，從分子水平探討DCM心室重塑的發(fā)

4、病機制，為開辟DCM的治療新的思路提供一定的實驗依據(jù)。
　　 方法: 將8周齡、清潔級雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠[徐州醫(yī)學院實驗動物中心供應(yīng)]體重250±10g。 隨機分為三組：（1）正常對照組（NC組）：生理鹽水2ml/kg腹腔注射，每周一次，共8周，8只；（2）單純模型組（ADM組）：鹽酸多柔比星（浙江海正藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號:H33021980）2mg/kg體重腹腔注射，每周1次，共8周，12只；(3)

5、氯沙坦組(LOS組)：鹽酸多柔比星2mg/kg體重腹腔注射，每周1次，共8周，12只，氯沙坦（杭州默沙東制藥有限公司，批號：50mg H20000371）10mg/kg體重灌胃，于首次阿霉素用后4周開始，1次/日，共4周，末次注射ADM后10天，無菌取出心臟。本實驗檢測的指標有:（1）所有大鼠稱體重(BW)、心臟重量（CW）和左室重量（LVW）計算心重指數(shù)（CWI=CW/BW)、左室指數(shù)（LVWI=LVW/BW）；（2）采用免疫組化法檢

6、測心肌Ⅰ、Ⅲ型膠原表達及比值；（3）采用Western blot法檢測AT1受體表達（4）采用活性比色定量法測定心肌組織CaN的活性。
　　 結(jié)果:
　　 1. 光鏡下心肌病理改變：對照組心肌細胞排列均勻整齊，橫紋清楚，細胞大小均一，心肌細胞間隙無變化。模型組心肌細胞肥大、伸長、灶狀壞死,肌質(zhì)變性,核大、深染，間質(zhì)纖維化、膠原增生，證實阿霉素誘導(dǎo)SD大鼠心肌膠原重塑模型是成功的。氯沙坦組大部分心肌組織呈平行排列，結(jié)構(gòu)清晰

7、，間質(zhì)有少量疏松結(jié)締組織。
　　 2.心重指數(shù)（ CWI）和左室指數(shù)（LVWI）：模型組（2.86±0.05，2.20±0.02）與正常對照組（2.78±0.02，2.18±0.01 ）相比，CWI和LVWI均升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；與模型組比較，氯沙坦（2.82±0.05，2.19±0.03）治療組CWI和LVWI均有不同程度下降，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；氯沙坦治療組與正常對照組比較，CWI和LVWI

8、無明顯差別。
　　 3. 心肌I、III型心肌膠原的表達及I／III比值：模型組（62547.1±2440.8， 49485.0±2020.5,1.26±0.01）與正常對照組（605.1±35.3，528.2±31.6,1.15±0.03）相比，I、III型心肌膠原的表達及比值均升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；氯沙坦治療組（14572.1±425.1,11847.2±436.9,1.23±0.02）與模型組比較，I、I

9、II型心肌膠原的表達及比值均降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），但與對照組比較，I、III型心肌膠原的表達及比值仍均升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　 4. 心肌組織AT1受體的表達：模型組(6582±562.88)與正常對照組(3623±82.64)相比，AT1受體的表達上調(diào)，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；氯沙坦組(4132±546.25)與模型組相比，AT1受體的表達下調(diào)，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）

10、。 5.心肌組織鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)活性：與正常對照組（0.283±0.010）相比，模型組（0.465±0.040）CaN活性增高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；與模型組比較，氯沙坦治療組（0.326±0.050）CaN活性降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　 結(jié)論:
　　 1. 在阿霉素誘導(dǎo)的SD大鼠心肌膠原重塑中，CaN信號通路介導(dǎo)了心肌纖維化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)；
　　 2. SD大鼠的心肌纖維化