水蛭素對(duì)阿霉素腎病、腎硬化大鼠模型TGF-β1影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　1.建立大鼠阿霉素腎病、腎硬化動(dòng)物模型，應(yīng)用水蛭素(脈血康腸溶膠囊)來(lái)治療大鼠阿霉素腎病、腎硬化，觀察其療效，評(píng)價(jià)其對(duì)腎病、腎硬化病理進(jìn)展過(guò)程的作用，以期發(fā)現(xiàn)對(duì)腎病、腎硬化有治療作用的中成藥物，
　　2.探討水蛭素治療腎病、腎硬化的作用機(jī)理，從而更好地指導(dǎo)臨床上對(duì)腎病、腎硬化的治療。
　　材料與方法：
　　將用阿霉素誘導(dǎo)形成腎病、腎硬化的Wistar大鼠50只，進(jìn)行隨機(jī)分組，分為正常對(duì)照A組(10只)

2、、腎病對(duì)照B組(10只)、腎硬化對(duì)照C組(10只)、腎病水蛭素治療組D組(10只)、腎硬化水蛭素治療E組(10只)。觀測(cè)各組大鼠血生化:尿蛋白、血漿白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)、血脂(TG、CHO)及尿液分析:尿蛋白定性的變化，共監(jiān)測(cè)5次，分別為模型制造前、第一次尾靜脈注射阿霉素2周后、第二次尾靜脈注射阿霉素2周后、水蛭素灌胃治療前、4周灌胃實(shí)驗(yàn)結(jié)束后。模型制造成功后，給予水蛭素灌胃治療，療程4周，之后將各組大鼠麻醉

3、10％福爾馬林體循環(huán)灌注處死，留取雙側(cè)腎臟標(biāo)本，常規(guī)方法進(jìn)行組織脫水、石蠟包埋及切片，并進(jìn)行HE法染色，光境下觀察腎組織中腎小球硬化、腎小管損傷及其它病理性損害的改變及其程度，并用免疫組化(SP法)觀察腎臟組織內(nèi)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)的分布及表達(dá)。通過(guò)上述指標(biāo)來(lái)評(píng)估水蛭素藥物對(duì)腎病、腎硬化的治療效果。
　　結(jié)果：
　　1.尿蛋白定性方面
　　第一次尾靜脈注射阿霉素后，B、C、D、E組均出現(xiàn)蛋白尿，第二次注射后

4、C、E組蛋白量明顯較較第一次注射后增多。水蛭素治療4周后，D與B組、E組與C組蛋白定性可見(jiàn)明顯減少。
　　2.血生化方面
　　B、C、D、E組在第一次尾靜脈注射阿霉素2周后血總蛋白、白蛋白均出現(xiàn)不同程度的降低及血總膽固醇、甘油三酯的升高，第二次注射后C、E組低蛋白血癥、高脂血癥加重并出現(xiàn)輕度腎功能的損害血肌酐、尿素氮出現(xiàn)增高。經(jīng)水蛭素干預(yù)治療后，D組與B組相比血總膽固醇及甘油三酯可見(jiàn)明顯降低，血白蛋白及總蛋白有所回升，E組與

5、D組比較除上述相同結(jié)果外，血肌酐、尿素也稍有降低。
　　3.腎組織HE染色病理方面
　　A組:大鼠腎臟外觀大小正常，質(zhì)韌，表面光滑，腎皮質(zhì)、髓質(zhì)結(jié)構(gòu)分界清晰，腎小球毛細(xì)血管壁未見(jiàn)增厚，血管絆未見(jiàn)閉塞，未見(jiàn)球囊粘連，未見(jiàn)系膜細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)增生。各級(jí)腎小管及集合管結(jié)構(gòu)可，腎小管上皮細(xì)胞未見(jiàn)空泡變性、脂滴樣變性、顆粒樣變性、玻璃樣變性或壞死，腎小管及集合管未見(jiàn)擴(kuò)張、萎縮，管腔內(nèi)未見(jiàn)管型，間質(zhì)未見(jiàn)血管擴(kuò)張、充血、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，小球

6、、小管周圍及間質(zhì)未見(jiàn)纖維增生。
　　B組:外觀蒼白，體積腫大，質(zhì)韌，切面腎皮質(zhì)與腎髓質(zhì)結(jié)構(gòu)欠清晰，系膜外基質(zhì)輕度增生，腎小管上皮細(xì)胞可見(jiàn)不同程度的顆粒變性、空泡變性，腎小管及集合管腔內(nèi)可見(jiàn)大量的蛋白管型，腎小管囊性擴(kuò)張，腎小管問(wèn)質(zhì)炎癥細(xì)胞輕度浸潤(rùn)。
　　C組:大鼠腎臟外觀黃，體積縮小，硬韌，表面呈顆粒，切面皮髓分界不清，腎小球系膜細(xì)胞、系膜基質(zhì)增生，腎小球基底膜斷裂，有局灶分布的節(jié)段性硬化的腎小球，毛細(xì)血管節(jié)段性絆閉塞，毛細(xì)

7、血管袢瘤樣擴(kuò)張，腎小球與腎小囊粘連，球囊壁增厚，腎小球及腎小管周圍纖維增生明顯、伴有成纖維細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小管明顯萎縮，周圍腎小管代償性片狀擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞脫落壞死、內(nèi)皮細(xì)胞空泡變性，蛋白管型形成。腎間質(zhì)重度炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　D組:外觀稍蒼白，腫大的體積減輕，切面腎皮質(zhì)、髓質(zhì)結(jié)構(gòu)欠清晰，病理變化各方面均較ADR腎病組有所緩解，腎小管及集合管腔內(nèi)蛋白管型減輕，但仍較多，腎小管間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減輕。
　　E組:外觀黃，稍變小。

8、腎小球、腎小管、腎問(wèn)質(zhì)病理改變程度較硬化組緩解。
　　4.腎組織免疫組化方面
　　B組可見(jiàn)腎小管陽(yáng)性表達(dá)，腎小球幾乎無(wú)表達(dá);C組腎小管強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，腎小球陽(yáng)性表達(dá);D組腎小管陽(yáng)性表達(dá)，較B組可見(jiàn)減輕;E組腎小球、腎小管陽(yáng)性表達(dá)，與C組相比TGF-β1所形成的棕黃色沉淀物明顯減少。
　　結(jié)論：
　　1.水蛭素能不同程度降低阿霉素腎病、腎硬化大鼠尿蛋白、血肌酐、尿素氮、血甘油三酯、總膽固醇，升高血總蛋白、白蛋白。