PI3K-Akt信號通路在七氟烷減輕阿霉素致大鼠心肌損傷中的作用及與自噬的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　觀察阿霉素致大鼠心肌細胞毒性作用，評價磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白質(zhì)絲氨酸蘇氨酸激酶(PI3K/Akt)信號通路在七氟烷減輕阿霉素致大鼠心肌損傷中的作用及其與自噬的關(guān)系。
　　方法:
　　動物實驗
　　取健康雄性SD大鼠36只，體重200～250g，隨機分為6組(n=6):對照組（C組），阿霉素?fù)p傷組（Dox組），七氟烷處理組（Sev組）、LY294002抑制劑組（LY組）、溶劑對照組（DMSO組）、3-

2、MA抑制劑組（3-MA組）。除C組外，其余5組建立阿霉素致大鼠心肌損傷模型。C組與Dox組單純機械通氣2h，Sev組、LY組（麻醉前尾靜脈注入LY294002）、DMSO組(尾靜脈注入DMSO)、3-MA組(腹腔注射3-MA)均七氟烷處理2h，心臟采血后處死大鼠取心肌，采用ELISA法測定血清中cTnⅠ濃度;Western blot法檢測總Akt(t-Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-

3、mTOR)及自噬標(biāo)記物微管相關(guān)蛋白1輕鏈3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)的表達;TUNEL法檢測細胞凋亡。
　　細胞實驗
　　培養(yǎng)H9c2心肌細胞，將細胞隨機分為6組(n=6):對照組(C組)、阿霉素?fù)p傷組（Dox組）、七氟烷處理組（Sev組）、LY294002抑制劑組(LY組)、溶劑對照組（DMSO組）、3-MA抑制劑組（3-MA組）。除C組外，其余5組均建立阿霉素致心肌細胞損傷模型。C組與Dox組不做處理，Sev組、LY組（暴露前培

4、養(yǎng)基中加入LY294002）、DMSO組（培養(yǎng)基中加入DMSO）、3-MA組（培養(yǎng)基中加入3-MA）均2.4％七氟烷暴露2h，采用ELISA法測定培養(yǎng)液中cTnⅠ濃度;Western blot法檢測總Akt(t-Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)及自噬標(biāo)記物微管相關(guān)蛋白1輕鏈3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)的表達。
　　結(jié)果:
　　動物實驗
　　1.大鼠一般情況觀察對照

5、組大鼠在實驗期間活動正常，體重增長，無死亡。模型組大鼠實驗期間活動減少，脫毛，精神萎靡，體重低于對照組，3只大鼠有腹水現(xiàn)象，共死亡4只，解剖發(fā)現(xiàn)肝腫大、腹水。
　　2.大鼠心肌損傷指標(biāo)的變化與C組比較，其余5組p-Akt、p-mTOR表達降低，LC3-Ⅱ、凋亡指數(shù)、血清cTnⅠ濃度升高(p＜0.05)。與Dox組比較，Sev組p-Akt、p-mTOR表達升高，LC3-Ⅱ、凋亡指數(shù)、cTnⅠ濃度降低(p＜0.05)。與Sev組比較，

6、LY組p-Akt、p-mTOR表達降低，LC3-Ⅱ、凋亡指數(shù)、血清cTnⅠ濃度升高(p＜0.05);3-MA組LC3-Ⅱ表達、血清cTnⅠ濃度降低(p＜0.05); DMSO組上述指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。
　　細胞實驗
　　與C組比較，其余5組p-Akt、p-mTOR表達降低，LC3-Ⅱ、cTnⅠ濃度升高(p＜0.05)。與Dox組比較，Sev組p-Akt、p-mTOR表達升高，LC3-Ⅱ、cTnⅠ濃度降低(p