術(shù)前局部注射VEGF對大鼠隨意皮瓣成活影響的實驗研究.pdf

1、目的:研究術(shù)前局部注射血管內(nèi)皮生長因子(Vascolar Endothelial Growth Factor,VEGF)對大鼠背部隨意皮瓣成活的影響,探討其作用機理,為臨床實驗和應用提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法:選用20只4月齡Wistar大鼠,均為雄性,體重270g±30g,隨機分為A、B兩組,每組10只。A組(實驗組):術(shù)前7天注射VEGF,B組(對照組):術(shù)前7天注射磷酸緩沖鹽(PBS)溶液。將大鼠用2％的戊巴比妥鈉(0.2

2、ml/100g)腹腔注射麻醉,背部脫毛后,在背部設(shè)計2cm×8cm的隨意皮瓣,蒂部位于雙側(cè)髂棘連線,皮瓣遠端位于頭側(cè)。在設(shè)計皮瓣上用1cm方格劃線標示,并用墨汁紋刺固定。A組術(shù)前7天于擬形成的皮瓣內(nèi)一次性皮下注射280ng VEGF,B組術(shù)前7天于擬形成的皮瓣內(nèi)一次性皮下注射相同體積的磷酸緩沖鹽(PBS)溶液。7天后所有大鼠在麻醉下形成隨意型皮瓣,并于皮瓣中線上中點處取0.5cm×0.5cm全層組織留做標本,皮瓣原位縫合。所有動物在皮瓣

3、形成后觀察皮瓣成活情況,并于術(shù)后第7天處死大鼠,測量皮瓣成活面積,計算成活率。將術(shù)中留取的組織標本進行常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色,進行組織病理學觀察,并進行PCNA、CD34免疫組化檢測,對CD34陽性血管作(血管密度)計數(shù),計算局部組織微血管密度(MVD)。
　　 結(jié)果:1.外科觀察:實驗組皮瓣遠端壞死范圍較小,近端存活皮瓣外觀紅潤,質(zhì)地柔軟,皮瓣周邊傷口炎癥反應輕微,組織水腫不明顯。對照組皮瓣遠端壞死范圍較大,近端存活區(qū)皮

4、瓣外觀稍欠紅潤,質(zhì)地稍硬,周邊傷口炎癥反應稍重,皮瓣水腫較明顯。2.皮瓣存活率檢測:皮瓣存活率為皮瓣存活區(qū)與皮瓣總面積之比。實驗組皮瓣存活率為67.12％,對照組皮瓣存活率為40.69％,兩組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。3.組織學檢查:標本HE染色,實驗組皮瓣組織表皮變薄,皮下有大面積肉芽組織增生,皮膚附屬器豐富,血管內(nèi)皮細胞顯示增生。對照組表皮正常,角化正常,皮下肉芽組織增生不明顯,皮膚附屬器相對較少,血管內(nèi)皮細胞增生不明

5、顯。4.增殖細胞核抗原(PCNA)的檢測:用免疫組織化學方法檢測大鼠皮瓣中PCNA蛋白的表達。PCNA主要在皮膚的棘層及基底細胞層和真皮層毛囊、皮質(zhì)腺表達。表現(xiàn)為細胞核著色,陽性染色呈棕黃色顆粒物。隨機選取5個視野(100×),利用FR-988生物顯微圖象分析系統(tǒng)對PCNA蛋白表達進行分析,用平均灰度值來表示,平均灰度值大(染色強度弱、透光度強)蛋白表達少,反之則表達多。實驗組(A)平均灰度為64.37±0.91,對照組(B)平均灰度為

6、68.71±2.07,實驗組(A)較對照組(B)PCNA表達增強,結(jié)果分析有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。5.皮瓣內(nèi)微血管密度(MVD)檢測:采用免疫組織化學方法檢測大鼠皮瓣中CD34蛋白的表達,利用FR-988生物顯微圖象分析系統(tǒng)對CD34蛋白表達進行分析,CD34主要在毛細血管、小動脈和小靜脈內(nèi)皮細胞表達,陽性染色呈棕黃色顆粒物。在高倍鏡下取5個視野,用顯微鏡測微尺進行計數(shù),以細胞個數(shù)/mm2為單位。實驗組(A)平均微血管密度為21.