不同劑量重組人生長(zhǎng)激素皮下注射對(duì)大鼠背部隨意皮瓣存活影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：隨著對(duì)創(chuàng)面修復(fù)的不斷深入研究，越來(lái)越多的目光轉(zhuǎn)向皮瓣修復(fù)。這種修復(fù)方法不僅能完成對(duì)創(chuàng)面的完全覆蓋，還能解決創(chuàng)基薄弱、骨及肌腱外露等傳統(tǒng)手術(shù)修復(fù)困難的難治性創(chuàng)面，因此，各大外科對(duì)皮瓣修復(fù)的應(yīng)用也日益頻繁。而隨意皮瓣作為其中最常用方法之一，其成活率的提高一直廣受醫(yī)生、學(xué)者關(guān)注和研究。隨意皮瓣內(nèi)缺少知名血管及缺血-再灌注損傷（I-R損傷）仍極大的限制著隨意皮瓣的成活。近年來(lái)，隨著皮瓣設(shè)計(jì)的不斷完善，比如：最佳長(zhǎng)寬比例、皮瓣形狀、術(shù)中

2、不同血管吻合方式、延遲行皮瓣移植、加強(qiáng)創(chuàng)面護(hù)理、術(shù)后定期高壓氧治療以及更換敷料時(shí)各種生長(zhǎng)因子的應(yīng)用等方法的大量推行，皮瓣成活率顯著上升，但臨床應(yīng)用中皮瓣壞死的情況仍屢見(jiàn)不鮮。如何能最大程度避免皮瓣中I-R損傷的發(fā)生，提高其皮瓣生存率成為近年來(lái)的熱門研究方向。重組人生長(zhǎng)激素（rhGH）在以往研究中已被證實(shí)了有增強(qiáng)血漿蛋白mRNA表達(dá)和促進(jìn)血清白蛋白（ALB）合成、提高血糖、分解脂質(zhì)、免疫調(diào)控、增生血管、減少蛋白分解,減少氮丟失,促進(jìn)傷口愈

3、合的作用。在此基礎(chǔ)之上，rhGH的臨床應(yīng)用不斷增加，并擴(kuò)展到燒傷創(chuàng)面及皮瓣存活方面。
　　皮瓣移植后補(bǔ)充rhGH可以明顯降低炎癥因子白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-a（TNF-a）的表達(dá)，減少中性粒細(xì)胞的聚集。并刺激單核細(xì)胞的遷移、促進(jìn)超氧陰離子生成，使機(jī)體的抵抗力得以提高，從而減輕炎癥反應(yīng)。彭麗霞等研究表明，大鼠皮下注射rhGH后可促進(jìn)皮瓣中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)，從而起到促進(jìn)血

4、管新生的作用，使皮瓣壞死率降低。但其中劑量的選擇尚未進(jìn)行明確實(shí)驗(yàn)證明。基于上述原因，本次實(shí)驗(yàn)以大鼠為模型，驗(yàn)證不同劑量rhGH對(duì)大鼠背部隨意皮瓣的影響，以了解其皮下注射的有效劑量。
　　目的：通過(guò)皮下注射rhGH影響大鼠背部隨意皮瓣成活，并采用不同注射劑量，觀察不同劑量的rhGH對(duì)大鼠背部隨意皮瓣影響程度，找出最佳注射劑量，為其臨床應(yīng)用前景做出初步評(píng)估。
　　方法：健康成年SD大鼠64只，均在其背部正中設(shè)計(jì)蒂在尾端的大小為2

5、cm*4cm的隨意皮瓣，并采用隨機(jī)分配原則，將大鼠分為A（生理鹽水組）、B（0.05IU/Kg rhGH組）、C（0.1 IU/Kg rhGH組）、D（0.2 IU/Kg rhGH組）四組。術(shù)后即刻開(kāi)始皮下注射藥物，連續(xù)7天，一日一次。四組均于術(shù)后第7天拍照計(jì)算皮瓣成活率，并取所有皮瓣遠(yuǎn)端進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察。將標(biāo)本進(jìn)行HE染色、免疫組化染色觀察VEGF及CD34在組織中的表達(dá)情況，計(jì)算皮瓣微血管密度（MVD），數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，明確實(shí)驗(yàn)

6、目的。
　　結(jié)果：1、皮瓣大體觀察：A組皮瓣近端皮瓣成活區(qū)呈粉紅色，毛發(fā)稀疏。中段及遠(yuǎn)端部分壞死，呈黑色，質(zhì)硬，彈性明顯降低，無(wú)毛發(fā)生長(zhǎng)，針刺不出血，皮瓣下淡紅色分泌物較多。B組皮瓣近端色澤紅潤(rùn)，成活尚可，中段開(kāi)始逐漸色澤晦暗，呈棕色，少量黑色痂殼附著，彈性降低，針刺可見(jiàn)少量出血，毛發(fā)逐漸稀疏，皮瓣下存在少量分泌物，直至遠(yuǎn)端色棕黑。C組及D組皮瓣成活情況相似，大部分皮瓣存活良好，近端及中段呈淡紅色，彈性與正常組織相似，無(wú)明顯紅腫等

7、情況。遠(yuǎn)端及少許邊緣部位，可見(jiàn)部分棕黑色壞死區(qū)，面積遠(yuǎn)小于A、B組，針刺出血，皮瓣下無(wú)明顯積血積液。
　　2、皮瓣成活率：經(jīng)實(shí)驗(yàn)及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析可以得出：A組（對(duì)照組）為(57.72±2.03)％，B組為(72.75±0.97)％，C組為(81.37±1.49)％，D組為(82.31±1.59)％。將全部數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA）得出：P＜0.05，各組數(shù)據(jù)總體均數(shù)不全相等。再運(yùn)用LSD法將各組數(shù)據(jù)進(jìn)行兩兩比

8、較可得：各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組進(jìn)行比較，P＜O．05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即rhGH皮下注射可提高皮瓣成活率。B組與C、D兩組比較結(jié)果可見(jiàn)：P＜O．05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可得出低劑量組rhGH對(duì)皮瓣成活率的促進(jìn)作用低于中、高劑量組；C、D組兩組統(tǒng)計(jì)學(xué)比較得出P＞O．05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，故中、高劑量rhGH促進(jìn)皮瓣成活無(wú)顯著性差異。
　　3、HE染色可見(jiàn)：A組鏡下見(jiàn)組織結(jié)構(gòu)混亂不清，各層結(jié)構(gòu)顯示不明，組織明顯水腫，大量中性粒細(xì)胞及單核

9、細(xì)胞浸潤(rùn)，呈急性炎癥反應(yīng)改變，少量薄壁血管生長(zhǎng)，無(wú)明顯管狀血管，部分纖維組織生長(zhǎng)。B組真皮下組織較混亂，組織水腫及中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤(rùn)較A組減輕，大量毛細(xì)血管生長(zhǎng)，肉芽清晰可見(jiàn)。C組及D組鏡下少許炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，組織結(jié)構(gòu)顯示清晰，新生管狀血管生成，內(nèi)可見(jiàn)紅細(xì)胞充盈。
　　4、CD34及VEGF在組織中的表達(dá)：運(yùn)用免疫組化染色觀察組織內(nèi)CD34及VEGF的表達(dá)強(qiáng)弱，結(jié)果明確可見(jiàn)CD34染色玻片中CD34呈棕黃色顆粒，主要分布于細(xì)胞

10、漿毛細(xì)血管周圍，在B、C、D組中的表達(dá)明顯高于A組，D組最高，C組其次。而VEGF免疫組化檢測(cè)中呈藥物干預(yù)組可見(jiàn)大量棕黃色顆粒分布成團(tuán)狀，對(duì)照組則呈點(diǎn)狀散在分布，分布密度D組≥C組＞B組＞A組。
　　5、微血管密度檢測(cè)（MVD）：將CD34免疫組化染色玻片置于100倍光鏡視野下，每張玻片選取6個(gè)視野計(jì)數(shù)微血管數(shù)目并取其均值。A組：（5.00±1.46）條/mm2，B組（10.55±1.78）條/mm2,C組（14.40±1.63）

11、條/mm2，D組（15.19±1.46）條/mm2，進(jìn)行單因素方差分析后得出，P＜0.05，各組總體均數(shù)不完全相等，即表示各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。再LSD法兩兩比較得出，藥物干預(yù)組與對(duì)照組P＜0.05，有顯著差異，C、D組與B組比較得出P＜0.05，低劑量組微血管密度偏低。C、D兩組比較P＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：1）重組人生長(zhǎng)激素皮下注射可促進(jìn)大鼠背部隨意皮瓣內(nèi)CD34及VEGF的表達(dá)增加，從而促進(jìn)皮瓣內(nèi)新生血管