TNF-α與IL-1對(duì)骨結(jié)核破骨細(xì)胞誘導(dǎo)機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討熱處理結(jié)核桿菌凍干物與超聲裂解結(jié)核桿菌凍干物能否誘導(dǎo)小鼠骨髓單核細(xì)胞分化形成破骨細(xì)胞及熱處理結(jié)核桿菌凍干物與超聲裂解結(jié)核桿菌凍干物刺激小鼠骨髓單核細(xì)胞分泌的腫瘤壞死因子α（Tumor Necrosis Factorα，TNF-α）和白細(xì)胞介素-1（Interleukin-1，IL-1）濃度與小鼠破骨細(xì)胞分化形成的相關(guān)性及其機(jī)制。
　　方法：建立體外破骨細(xì)胞培養(yǎng)體系，觀察采用不同濃度（0.2μg/ml，2μg/ml，20μ

2、g/ml，200μg/ml）的熱處理結(jié)核分枝桿菌凍干物和超聲裂解結(jié)核分枝桿菌凍干物于對(duì)體外誘導(dǎo)小鼠骨髓單核細(xì)胞分化形成破骨細(xì)胞的影響,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP)染色和骨陷窩吸收實(shí)驗(yàn)來(lái)鑒定破骨細(xì)胞及其噬骨能力。收集誘導(dǎo)24h和48h后的細(xì)胞培養(yǎng)液，ELISA定量檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α、IL-1濃度。
　　結(jié)果：誘導(dǎo)24h、48h后，細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF

3、-α、IL-1濃度測(cè)定顯示熱處理結(jié)核分枝桿菌凍干物組中實(shí)驗(yàn)組與空白組對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。超聲裂解結(jié)核分枝桿菌凍干物組中低濃度（0.2μg/ml）組TNF-α、IL-1濃度與空白組對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。其余各濃度組TNF-α、IL-1濃度均高于空白組（P＜0.05），且隨著超聲裂解結(jié)核分枝桿菌凍干物濃度增加，細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α、IL-1濃度也逐漸增加，各濃度組TNF-α、IL-1濃度差均值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0

4、.05）。誘導(dǎo)7天TRAP染色示：不同濃度的熱處理結(jié)核分枝桿菌凍干物組中均有少量TRAP染色陽(yáng)性細(xì)胞形成，與空白組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。超聲裂解結(jié)核分枝桿菌凍干物組中均有TRAP染色陽(yáng)性細(xì)胞形成，低濃度超聲裂解結(jié)核分枝桿菌凍干物組（0.2μg/ml）與空白組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。2μg/ml、20μg/ml組與空白組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），200μg/ml組在接種培養(yǎng)3天后，培養(yǎng)液中出現(xiàn)大量漂浮死亡細(xì)

5、胞，鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及結(jié)構(gòu)模糊、裂解。骨陷窩吸收實(shí)驗(yàn)顯示：熱處理結(jié)核桿菌凍干物組與空白組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。低濃度超聲裂解結(jié)核桿菌凍干物組（0.2μg/ml、200μg/ml）與空白組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。余各濃度超聲裂解結(jié)核桿菌組與空白組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），且隨超聲裂解結(jié)核桿菌凍干物濃度增加，骨陷窩計(jì)數(shù)逐漸增大。200μg/ml組骨陷窩計(jì)數(shù)與20μg/ml組相比較骨陷窩計(jì)數(shù)明顯減少。