橄欖苦苷對IL-1β誘導(dǎo)的大鼠軟骨細胞損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的:
　　橄欖苦苷(OL)是橄欖樹果實中主要的酚類化合物，已被報道具有抗炎，抗腫瘤，抗糖尿病，保護腎臟的作用。骨關(guān)節(jié)炎(OA)是一種關(guān)節(jié)軟骨變性，炎癥引起的軟骨基質(zhì)降解為主要特點。本研究旨在評估橄欖苦苷對IL-1β誘導(dǎo)的SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞的影響。
　　方法:
　　選用酶兩步消化法消化SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨分離細胞，進行體外培養(yǎng)。利用光學(xué)顯微鏡觀察細胞的形態(tài)，阿爾新藍染色及Ⅱ型膠原免疫組化對軟骨細胞進行鑒定。橄欖苦苷對軟骨

2、細胞的細胞毒性采用CCK-8進行評估。取第2代軟骨細胞，分別用濃度為10，50或100μM的橄欖苦苷預(yù)先處理，隨后用IL-1β刺激細胞24小時，所生成的NO和PGE2的量分別用格里斯重氮化反應(yīng)和酶聯(lián)反應(yīng)吸附試驗進行評估。MMP-1，MMP-3，MMP-13，SOX9，COL2A1和aggrecan有關(guān)基因的表達使用實時熒光定量PCR進行定量檢測。iNOS和COX-2蛋白水平的表達選用免疫印跡試驗進行分析?；罨腘F-κB相關(guān)蛋白的表達同

3、樣用免疫印跡試驗進行分析。
　　結(jié)果:
　　軟骨細胞在不同濃度橄欖苦苷（10、50或100μM）培養(yǎng)24小時后，其生存能力與對照組相比無明顯影響。經(jīng)過橄欖苦苷預(yù)處理后明顯抑制NO和PGE2的生成。橄欖苦苷可以顯著降低IL-1β刺激下軟骨細胞MMP-1，MMP-3，MMP-13基因的表達，增加SOX9，COL2A1和aggrecan基因的表達。橄欖苦苷通過減少IκB蛋白的降解從而抑制IL-1β介導(dǎo)的NF-κB通路的活化。

4、>　　結(jié)論:
　　1、橄欖苦苷對軟骨細胞的活性無明顯影響;
　　2、橄欖苦苷可能通過抑制OA病理反應(yīng)中NO和PGE2的產(chǎn)生參與了OA的軟骨損傷修復(fù)過程;
　　3、橄欖苦苷能抑制IL-1β對MMP-1，MMP-3，MMP-13的誘導(dǎo)和激活作用，拮抗受損軟骨細胞蛋白聚糖和Ⅱ型膠原的降解;
　　4、橄欖苦苷可以抑制NF-κB的活性和IκBα的降解。推出橄欖苦苷通過抑制NF-κB的轉(zhuǎn)錄水平來抑制IL-1β誘導(dǎo)的炎性細胞因