平行設計雙氫青蒿素哌喹片人體藥動學及生物等效性評價的研究.pdf

1、目的:1.建立高效液相色譜-質譜法進行人血漿中雙氫青蒿素和哌喹濃度測定。2.平行設計雙氫青蒿素哌喹片在健康志愿者體內的藥動學及生物等效性研究，并評價它們的吸收、分布、代謝及排泄動力學特征。3.采用不同統計分析方法進行雙氫青蒿素哌喹片等效性評價，研究末端消除相及不同藥代動力學軟件對其等效性評價的影響。
　　 方法:1.血樣經處理后采用高效液相色譜-質譜聯用儀進行測定。雙氫青蒿素的質譜條件為:電噴霧電離源(ESI)，正離子模式檢測;

2、毛細管電壓4000 V;干燥氣溫度350℃，干燥氣(N2)流速12.0 L·min-1，霧化氣壓力45 psi;選擇性監(jiān)測質荷比（m/z）為221.2（雙氫青蒿素）和283.2（內標青蒿素）的離子峰，碎片電壓分別為80 V和70 V。其色譜條件為:選用色譜柱InertsilODS-3(4.6×150mm，5μm)，流動相為10 mmol·L-1乙酸銨（含0.1％甲酸）∶甲醇∶乙腈=37∶43∶20(V/V/V)，在線脫氣;柱溫:30℃，

3、流速:0.8 mL·min-1，進樣量:10μL。
　　 哌喹的質譜條件為:電噴霧電離源(ESI)，正離子模式檢測;毛細管電壓4000 V，干燥氣溫度為350℃，干燥氣(N2)流速11.0 L·min-1，霧化氣壓力50 psi;選擇性監(jiān)測質荷比(m/z)為535.2（哌喹）和235.1（內標利多卡因）的離子峰，碎片電壓分別為120 V和90 V。其色譜條件為:Gemini C18色譜柱(4.6×250mm，5μm)，流動相為乙

4、腈∶2.5 mM乙酸銨（氨水調pH值至10.5）=63∶37，在線脫氣;柱溫:25℃，流速:0.8 mL·min-1，進樣量:5μL。
　　 2.采用單中心、隨機、平行、對照試驗設計。72例健康男性受試者按體重配對后隨機分為兩組，分別服用雙氫青蒿素哌喹片試驗制劑或參比制劑，于藥前和藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5、6、8、10、12、24、36h和3、5、7、10、14、21、28天，肘靜脈取血6 mL

5、，肝素抗凝，6000rpm，離心5 min，分離血漿，-20℃冷凍保存待測。采用本課題建立的高效液相色譜-質譜法測定雙氫青蒿素和哌喹的經時血濃度。
　　 根據所測雙氫青蒿素、哌喹血濃度-時間數據，采用WinNonLin6.2.1藥代動力學軟件分別計算雙氫青蒿素、哌喹主要藥代動力學參數(t1/2，AUC0-t，AUC0-∞，CL，Vd)， Cmax和Tmax采用實測值，并根據試驗制劑和參比制劑雙氫青蒿素哌喹AUC0-t計算試驗制劑

6、的相對利用度。對雙氫青蒿素和哌喹主要藥動學參數AUC0-t和Cmax進行90％置信區(qū)間分析，評價試驗制劑和參比制劑的生物等效性。
　　 3.根據0-72h所測哌喹的血濃度-時間數據，用WinNonLin6.2.1藥代動力學軟件計算哌喹藥代動力學參數AUC0-72，Cmax和Tmax采用實測值，對哌喹藥動學參數AUC0-72和Cmax進行90％置信區(qū)間分析，評價試驗制劑和參比制劑的生物等效性，并比較其與AUC0-672等效性評價結

7、果的不同。
　　 采用PKsolver3.0和WinNonLin6.2.1兩種藥代動力學軟件對雙氫青蒿素哌喹片進行人體藥動學和生物等效性研究，用配對t檢驗對兩種軟件計算出的主要藥動學參數(t1/2，AUC0-t，AUC0-∞，CL，Vd)進行統計分析，考察是否有統計學差異，并比較二者生物等效性評價結果的不同。
　　 結果:1.本課題建立的HPLC-MS樣本測定條件下，雙氫青蒿素和哌喹的基質效應、回收率分別在96％～105

8、％、48％～62.5％和91％～109.3％、91％～108％，血漿中的基質對測定無干擾，滿足測定要求。雙氫青蒿素在5～500 ng·mL-1血漿濃度范圍內線性良好，r2＞0.99;哌喹在5～400 ng·mL-1血漿濃度范圍內線性良好，r2＞0.99。二者定量下限均為5 ng·mL-1，準確度分別為93％～107％、100％～110％，均在±20％之內，且精密度小于5％。雙氫青蒿素和哌喹血漿樣本穩(wěn)定性試驗的準確度分別在86％～113％

9、和88％～113％之間，精密度均小于11％，表明二者穩(wěn)定性良好。
　　 2.72名受試者單次口服試驗制劑或參比制劑雙氫青蒿素哌喹片后采用WinNonLin6.2.1藥代動力學軟件分析得出的雙氫青蒿素主要藥動學參數t1/2分別為(1.03±0.17)h和(1.11±0.28)h，Tmax分別為(1.72±0.96)h和(1.53±0.92)h，Cmax分別為(236.243±91.087) ng·mL-1和(245.184±120

10、.789) ng·mL-1，AUC0-t分別為(561.613±189.513) ng·mL-1·h和(552.821±240.838) ng·mL-1·h，AUC0-∞分別為(574.784±190.812) ng·mL-1·h和(565.195±241.822) ng·mL-1·h，CL分別為(236.0±88.9) L·h-1和(252.4±118.2) L·h-1, Vd分別為(347.4±141.5)L和(393.3±162.

11、4)L。以雙氫青蒿素AUC0-t計算相對生物利用度F為101.6％。哌喹主要藥代動力學參數t1/2分別為(289.08±171.11)h和(269.07±238.16)h，Tmax分別為(3.32±1.89)h和(3.13±0.91) h, Cmax分別為(223.815±110.931) ng·mL-1和(225.494±105.222)ng·mL-1, AUC0-t分別為(8969.881±4632.410) ng·mL-1·h和(

12、8817.516±4232.909)ng·mL-1·h, AUC0-∞分別為(11906.837±5792.982) ng·mL-1·h和(11461.232±5755.807)ng·mL-1·h, CL分別為(103.5±58.1) L·h-1和(109.6±63.4) L·h-1, Vd分別為(35076.5±15303.4)L和(32034.7±18566.3)L。以哌喹AUC0-t計算相對生物利用度F為101.7％。
　　

13、 雙氫青蒿素AUC0-t、 Cmax比值的90％置信區(qū)間分別為89.1％～121.8％、83.6％～119.3％;哌喹AUC0-t、 Cmax比值的90％置信區(qū)間分別為82.9％～123.8％、80.7％～120.9％;均分別落在80％～125％、75％～133％區(qū)間內。
　　 3.以哌喹AUC0-72計算相對生物利用度F為98.0％。哌喹AUC0-72比值的90％置信區(qū)間為83.5％～117.5％，同樣落在80％～125％區(qū)

14、間內。
　　 72名受試者單次口服試驗制劑或參比制劑雙氫青蒿素哌喹片后采用PKsolver3.0藥代動力學程序分析得出的雙氫青蒿素主要藥動學參數t1/2分別為(1.02±0.17)h和(1.11±0.27)h，Tmax分別為(1.72±0.96)h和(1.53±0.92)h，Cmax分別為(236.243±91.087) ng·mL-1和(245.184±120.789) ng·mL-1, AUC0-t分別為(575.108±1

15、94.250) ng·mL-1·h和(565.444±246.383) ng·mL-1·h, AUC0-∞分別為(588.198±195.521) ng·mL-1·h和(577.819±247.258) ng·mL-1·h，CL分別為(230.7±87.2) L·h-1和(246.9±115.5) L·h-1, Vd分別為(338.7±140.6)L和(382.4±156.8)L。以雙氫青蒿素AUC0-t計算相對生物利用度F為101.7

16、％。哌喹主要藥代動力學參數t1/2分別為(288.87±171.31)h和(269.07±238.16)h，Tmax分別為(3.32±1.89)h和(3.13±0.91) h, Cmax分別為(223.815±110.931) ng·mL-1和(225.494±105.222)ng·mL-1, AUC0-t分別為(9102.841±4723.946) ng·mL-1·h和(8958.835±4306.120)ng·mL-1·h, AUC

17、0-∞分別為(12035.729±5875.097) ng·mL-1·h和(11602.551±5814.924)ng·mL-1·h, CL分別為(102.4±57.2) L·h-1和(108.3±62.9) L·h-1,Vd分別為(34712.0±15249.5)L和(31715.6±18516.7)L。以哌喹AUC0-t計算相對生物利用度F為101.6％。雙氫青蒿素AUC0-t、 Cmax比值的90％置信區(qū)間分別為89.2％～121

18、.9％、83.6％～119.3％;哌喹AUC0-t、 Cmax比值的90％置信區(qū)間分別為82.8％～123.7％、80.7％～120.9％;均分別落在80％～125％、75％～133％區(qū)間內。
　　 結論:
　　 1.本文建立的高效液相色譜-質譜法簡便、靈敏、準確，適用于人血漿中雙氫青蒿素和哌喹濃度測定。
　　 2.72名受試者口服雙氫青蒿素哌喹片試驗制劑或參比制劑后在體內的藥動學特征和血藥濃度均存在很明顯的個體

19、差異，其中哌喹具有高表觀分布容積和低清除率，故半衰期很長，其血藥濃度-時間曲線出現多峰現象，證實其在體內存在肝腸循環(huán)。
　　 體內藥動學特征顯示，雙氫青蒿素和磷酸哌喹的復方制劑不僅在抗瘧機制上有協同作用，在藥動學和藥效學上也存在互補效應。
　　 雙氫青蒿素、哌喹主要藥代動力學參數AUC0-t、Cmax經90％置信區(qū)間分析，顯示兩制劑間無差異，符合生物等效的假設。即雙氫青蒿素哌喹片試驗制劑與市售雙氫青蒿素哌喹片參比制劑具有

20、生物等效性，為生物等效制劑。整個實驗過程順利，受試者服用雙氫青蒿素哌喹片試驗制劑或參比制劑后，3名受試者發(fā)生輕微不良事件，以上不良事件在短時間內消失，均未服用相關治療藥物。1名受試者試驗后肝功能輕微異常，7日內恢復正常，未服用治療藥物，其他受試者試驗前后未見實驗室檢查結果發(fā)生有臨床意義的改變。
　　 3.對于長半衰期藥物哌喹來說，采用AUC0-72和AUC0-672分別評價其生物等效性結果相近，即采取0-72 h的血藥濃度-時間