2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、犬細(xì)小病毒病是由犬細(xì)小病毒(Canineparvovirus,CPV)感染引起的犬的一種急性傳染病,以劇烈的嘔吐、出血性腸炎和白細(xì)胞顯著減少為主要特征,并可引起犬急性心肌炎。該病發(fā)病急,病程短,傳染性強(qiáng),死亡率高,是危害我國養(yǎng)犬業(yè)最為嚴(yán)重的傳染病之一,可造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。 根據(jù)GeneBank已發(fā)表的犬細(xì)小病毒VP2基因序列,設(shè)計(jì)一對(duì)特異引物,采用SDS-蛋白酶K-酚氯仿抽提法,從犬細(xì)小病毒/犬瘟熱二聯(lián)苗中提取犬細(xì)小病毒的基因

2、組DNA,并以此為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,獲得了犬細(xì)小病毒VP2基因,將其克隆到質(zhì)粒pET22b(+)的相應(yīng)位點(diǎn)上。重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定和核苷酸序列分析,結(jié)果表明所插入的閱讀框正確,序列無誤,從而成功地構(gòu)建了pET22b/VP2原核表達(dá)載體。 將測序正確的重組質(zhì)粒pET22b/VP2分別轉(zhuǎn)化E.coliBL21(DE3)和E.coliRosettaTM(DE3)兩種不同宿主菌,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE電泳結(jié)果表明:重組質(zhì)粒p

3、ET22b/VP2在E.coliBL21(DE3)中未見明顯的目的蛋白表達(dá)帶;而在E.coliRosettTM(DE3)中則獲得了高效表達(dá),在相應(yīng)位置上(68kd處)可見明顯的目的蛋白表達(dá)帶;重組蛋白主要以包涵體的形式表達(dá),且表達(dá)量占菌體總蛋白的30%以上;Ni2+親和層柱純化收集蛋白,純化后的蛋白經(jīng)復(fù)性處理后,能與犬細(xì)小病毒陽性血清發(fā)生特異反應(yīng)。 本試驗(yàn)成功地克隆了犬細(xì)小病毒VP2基因完整片段,并實(shí)現(xiàn)了其在原核表達(dá)系統(tǒng)中的高效

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