假性甲狀旁腺功能減退癥與GNAS1基因的研究.pdf

1、背景與目的：
　　 假性甲狀旁腺功能減退癥(PHP)主要表現(xiàn)為靶器官(腎臟、骨骼等)對甲狀旁腺激素(PTH)的抵抗,臨床特點為手足抽搐、低血鈣、高血磷、低尿鈣、低尿磷、高PTH血癥,部分患者具有特殊體型如圓臉、短頸、身材矮小、肥胖、指(趾)粗短畸形,甚至智力發(fā)育障礙。PHP可分為以下幾種類型:PHP I a、PHP I b、PHP I c與PHPⅡ型。國外研究提示PHP I a型是由GNAS1基因1-13號外顯子失活性突變所致,

2、PHP I b型與GNAS1基因三個差異甲基化區(qū)域(DMRs)的甲基化異常相關(guān)。GNAS1是一種復(fù)合的印記基因,位于染色體20q13,由13個外顯子和12個內(nèi)含子組成,約20kb；通過基因上游不同的啟動子和共同的2-13號外顯子轉(zhuǎn)錄、翻譯產(chǎn)生多種基因產(chǎn)物,其主要產(chǎn)物是Gsα,由GNAS1最下游的啟動子(外顯子1)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生；其啟動子區(qū)包含三個DMRs,即母源等位基因甲基化的1A、XLa和父源等位基因甲基化的NESP55區(qū)域。本研究檢測10

3、例中國PHP患者是否存在GNAS1基因13個外顯子的突變及甲基化區(qū)域的異常,探討該病的分子遺傳學(xué)機制。
　　 對象和方法：
　　 對我科曾經(jīng)收治的10例PHP患者及其父母提取全血基因組DNA,采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和直接測序法對GNAS1基因1-13號外顯子進行突變檢測,甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(MSP)聯(lián)合直接測序法檢測該基因三個DMRs區(qū)域甲基化狀態(tài),同時選用50例健康人作為正常對照。
　　 結(jié)果：

4、>　　 1.3例PHP I a型患者GNAS1基因13個外顯子均未發(fā)現(xiàn)突變,亦不存在其啟動子區(qū)的甲基化異常。
　　 2.7例PHP I b型患者在1A區(qū)域僅非甲基化引物擴增出目的條帶,而患者父母和正常對照者兩對引物均能擴增出目的條帶,并用直接測序法進行證實,即PHPIb患者存在GNAS1基因1A區(qū)域的甲基化缺失(印記缺陷)。而在NESP55和XLa兩個區(qū)域,患者及其父母和正常對照者的兩對引物均能擴增出目的條帶,同樣用直接測序法