急性CO中毒大鼠腦脫髓鞘病變及免疫因子表達的研究.pdf

1、一氧化碳（Carbon monoxide，CO）是一種由含碳物質不完全燃燒所釋放的無色無味氣體，其毒性早已為人所知。但隨著人們生活及衛(wèi)生水平的不斷提高，一氧化碳中毒卻沒有相應的下降趨勢，仍然是當今發(fā)生率和死亡率最高的中毒。在臨床上，急性一氧化碳中毒的病人經過及時治療，多數可以痊愈,但大約有10％～30％的病人于急性中毒恢復后，經過一段時間的“假愈期”（數日或數周），再次出現以癡呆、精神癥狀和錐體外系癥狀為主的神經系統(tǒng)疾病，稱為急性CO中

2、毒遲發(fā)性腦病，簡稱遲發(fā)性腦?。―elayed neuropsychologic sequelae，DNS）。臨床上，DNS是急性CO中毒最嚴重的后遺癥，嚴重影響患者生存質量，給社會和家庭帶來巨大負擔，但其確切的發(fā)病機制尚不清楚。
　　傳統(tǒng)研究表明DNS的發(fā)生是多種機制共同作用的結果，隨著人們對DNS研究的深入，越來越多的證據表明DNS的發(fā)病與免疫因素有關。急性一氧化碳中毒后，由于腦內自由基生成增加，可引起了脂質過氧化，導致腦內髓鞘

3、堿性蛋白（Myelin basic protein，MBP）的改變，如發(fā)生離子電荷或空間結構等改變。由于MBP是神經系統(tǒng)髓鞘重要組成成分，也是髓鞘中抗原活性最強的蛋白質,這種變構的MBP，可能作為一種抗原性的物質，激活自身免疫反應，神經系統(tǒng)腦組織髓鞘因受到這種免疫攻擊而脫失，從而引起一系列免疫損傷。
　　巨噬細胞炎性蛋白-1α（Macrophage inflammatory protein-1α，MIP-1α）和細胞間黏附分子-1

4、（intercellular adhesion molecular-1，ICAM-1）是兩種常見的免疫因子，參與局部炎癥和免疫反應的發(fā)生，在炎性細胞的浸潤和遷移中起重大作用。MIP-1α是一種趨化性細胞因子，它可趨化單核/巨噬細胞,T淋巴細胞和NK細胞等細胞。ICAM-1是一種細胞間黏附分子，主要表達于內皮細胞,淋巴細胞,介導單核細胞、淋巴細胞、中性粒細胞及激活內皮細胞。在免疫反應中，這兩種因子主要參與免疫細胞的浸潤過程，它們介導免疫細

5、胞穿越血腦屏障到達炎癥部位，據此我們推測這兩種免疫因子可能參與DNS的發(fā)病過程。
　　臨床上，高壓氧（Hyperbaric oxygen，HBO）對治療DNS作用顯著，但其作用機制仍未完全闡明，HBO可能通過減輕DNS的脫髓鞘病變以及影響MIP-1α和ICAM-1的表達而改善患者臨床癥狀。
　　本實驗通過建立DNS大鼠模型，采用電鏡技術觀察CO中毒后大鼠腦組織髓鞘超微結構改變，利用H-E染色和Luxol fast blue染

6、色觀察腦組織病理形態(tài)學改變，并采用免疫組化染色的方法,觀察大鼠腦組織MBP、MIP-1α和ICAM-1的表達變化，同時給予HBO治療后，觀察HBO對上述細胞因子的影響。
　　主要研究結果如下：
　　1．腦組織髓鞘超微結構改變
　　在電鏡下觀察腦組織髓鞘，CO染毒后3d，開始出現軸突和髓鞘之間分裂，染毒后14d，髓鞘紋理不清，結構紊亂，出現嚴重的板層疏松分裂，髓鞘膜與髓鞘板層有間隙，見空泡形成，染毒后立即進行高壓氧治療，

7、每天一次，共14d，與染毒14d組比較，髓鞘結構變得清晰，板層分離現象減輕，軸突中的部分空泡消失。
　　2．腦組織病理形態(tài)學改變
　　在HE染色標本上，CO中毒后大鼠腦組織出現了嚴重的病理損傷，主要表現為出現大量變性和壞死的神經元，以及神經元結構的紊亂，包括胞體縮小，染色質濃縮甚至碎裂，胞質和胞核界限不清。損傷最嚴重部位為大腦皮質區(qū)和海馬區(qū)。最嚴重的時間點為7d。Luxol fast blue染色結果顯示CO中毒后大鼠腦組織

8、神經纖維出現排列紊亂、疏松，部分纖維脫失未著色，呈現明顯脫髓鞘現象，其中以染毒后14d最為明顯，與對照組相比，染毒組NF積分光密度顯著減低(P<0．05)，當給予高壓氧治療14d后，神經纖維排列變得整齊，集中，脫髓鞘現象減輕。
　　3．MBP免疫組化染色及Western blotting檢測結果
　　免疫組化染色顯示，CO染毒后3d，MBP表達開始減少，到染毒后14d，減少達到高峰，染毒組MBP積分光密度較對照組減低明顯(P

9、<0．05)，而HBO治療組較染毒14d組減輕，IOD值增加(P<0．05)。Western blot結果顯示，在染毒后3d，MBP表達減少，至染毒后14d，減少達到高峰(P<0．05)，HBO治療組較染毒后14d減輕(P<0．05)。
　　4．MIP-1α和ICAM-1免疫組化染色
　　免疫組化結果顯示，對照組無MIP-1α和ICAM-1的表達；染毒1d組MIP-1α開始出現表達，ICAM-1無表達；染毒3d組，MIP-1

10、α表達增加，數量達高峰(P<0．05)，ICAM-1開始有表達；至染毒7d組，MIP-1α的表達開始減少，ICAM-1的表達數量達高峰(P<0．05)，在血管內皮細胞和疑似血液內滲透到腦內的淋巴細胞上均有表達；染毒后立即進行HBO治療7d，MIP-1α和ICAM-1的表達均顯著減少，與染毒7d組相比有差異(P<0．05)；染毒10d組，幾乎無MIP-1α，偶見少數淋巴細胞上有ICAM-1陽性表達。
　　總之，本實驗從分子、組織病理