雞源大腸桿菌氟苯尼考耐藥基因floR檢測(cè)及傳播機(jī)制的初步研究.pdf

1、隨著獸醫(yī)臨床菌株耐藥性逐年上升，多重耐藥及泛耐藥現(xiàn)象越來(lái)越嚴(yán)重。但是新獸藥的研發(fā)進(jìn)展較緩慢，價(jià)格昂貴，對(duì)早期特別是不容易引起耐藥性的藥物的重新應(yīng)用可作為控制多重耐藥菌株導(dǎo)致的疾病的首要選擇。本論文初步研究了雞源大腸桿菌中質(zhì)粒介導(dǎo)氟苯尼考耐藥基因floR的流行狀況和傳播機(jī)制，為減少氟苯尼考耐藥菌株的出現(xiàn)和減緩耐藥的程度提供依據(jù)，為解決獸醫(yī)臨床耐藥性傳播問(wèn)題提供新思路。
　　本研究對(duì)2013～2014年分離自常州地區(qū)的80株雞源大腸桿

2、菌，首先，采用PCR方法檢測(cè)質(zhì)粒介導(dǎo)氟苯尼考耐藥基因floR，并以微量肉湯稀釋法測(cè)定80株大腸桿菌對(duì)阿莫西林、氟苯尼考、黏菌素、鏈霉素、恩諾沙星、多西環(huán)素、頭孢喹肟、安普霉素的體外最小抑菌濃度。其次，采用大腸桿菌系統(tǒng)進(jìn)化分群對(duì)80株大腸桿菌的親緣關(guān)系進(jìn)行判定。第三，對(duì)78株floR陽(yáng)性菌株進(jìn)行接合實(shí)驗(yàn)，對(duì)得到的疑似接合子通過(guò)最小抑菌濃度和PCR兩種方法進(jìn)行鑒定，并分析供體菌、受體菌、接合子三者的最小抑菌濃度以及接合子中floR耐藥基因的

3、轉(zhuǎn)移情況。第四，取接合實(shí)驗(yàn)成功的菌株進(jìn)行脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)并通過(guò)Southern雜交等方法研究floR的傳播方式以及floR耐藥基因的定位。研究結(jié)果如下:
　　80株禽源大腸桿菌oR基因檢出率為97.50％(78/80)。floR基因在禽源大腸桿菌中具有相當(dāng)高的流行率。細(xì)菌對(duì)各藥物的耐藥率分別為:阿莫西林96.25％(77/80)、氟苯尼考90.00％(72/80)、黏菌素80.00％(64/80)、鏈霉素75.00％(6

4、0/80)、恩諾沙星72.50％(58/80)、多西環(huán)素56.25％(45/80)、安普霉素18.75％(15/80)。說(shuō)明本研究中禽源大腸桿菌對(duì)氟苯尼考等大多藥物都有顯示嚴(yán)重的耐藥情況。
　　通過(guò)大腸桿菌種族系統(tǒng)進(jìn)化分析，80株禽源大腸桿菌中，非致病性菌株(A)為35.00％(28/80)、低致病性菌株(B1)35.00％(28/80)、高致病性菌株(B2)2.50％(2/80)和高致病性菌株(D)27.50％(22/80)。<

5、br>　　78株floR陽(yáng)性菌株接合實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，接合實(shí)驗(yàn)的接合率為62.83％(49/78)，floR接合子對(duì)氟苯尼考的MIC值比受體菌升高了16-32倍，而比供體菌MIC降低了2-8倍。同時(shí)發(fā)現(xiàn)接合子對(duì)阿莫西林、黏菌素、鏈霉素、恩諾沙星、多西環(huán)素、安普霉素的MIC值也發(fā)生了相應(yīng)的變化，由此得出氟苯尼考和其它常見(jiàn)藥物的耐藥性存在共傳遞效應(yīng)。且49株接合子中均含有floR耐藥基因。挑取的TM10、TM12和WJ13菌株檢測(cè)進(jìn)行脈沖場(chǎng)凝膠