雞源大腸桿菌16S rRNA甲基化酶基因的檢測(cè)及擴(kuò)散機(jī)制.pdf

1、為了解氨基糖苷類藥物高水平耐藥16S rRNA甲基化酶基因(armA,rmtB,rmtC,rmtD和npmA)在河南地區(qū)雞源大腸細(xì)菌中的流行狀況,對(duì)2005～2007年在河南地區(qū)9地市發(fā)病雞的病料分離保存的309株大腸桿菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn),并分別設(shè)計(jì)特異性引物對(duì)其進(jìn)行16S rRNA甲基化酶基因的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增。在此基礎(chǔ)上,為進(jìn)一步探討16SrRNA甲基化酶基因的擴(kuò)散機(jī)制,并為養(yǎng)殖業(yè)合理使用氨基糖苷類藥物,阻斷耐藥基因的擴(kuò)散和新藥研發(fā)提

2、供依據(jù),采用質(zhì)粒接合試驗(yàn)和脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)分別從水平轉(zhuǎn)移和垂直克隆傳播兩方面研究耐藥基因的擴(kuò)散機(jī)制。
　　 PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,在2005—2007年發(fā)病雞分離的309株大腸桿菌中,6種16S rRNA甲基化酶基因僅可檢測(cè)到armA和rmtB,總檢出率分別為4.5％(14/309)和18.8％(58/309)。提示河南地區(qū)發(fā)病雞分離的大腸桿菌對(duì)氨基糖苷類藥物高水平耐藥16s rRNA甲基化酶基因產(chǎn)生率較高,且以armA

3、和rmtB為主。armA和rmtB陽(yáng)性菌對(duì)15種抗菌藥物呈現(xiàn)多重耐藥。
　　 接合試驗(yàn)采用大腸桿菌J53AzR作為受體菌,選取部分armA和rmtB陽(yáng)性菌株作為供體菌,在含有疊氮鈉和阿米卡星的胰蛋白胨大豆瓊脂平面上篩選接合子,接合子由PCR檢測(cè)鑒定。接合試驗(yàn)結(jié)果表明,部分armA和rmtB耐藥基因可以通過(guò)接合性質(zhì)粒的水平轉(zhuǎn)移進(jìn)行傳播。
　　 PFGE分型結(jié)果表明,10株armA陽(yáng)性菌分為2種基因型(A、B),38株rmt