重組人腸三葉因子對燒傷小鼠腸黏膜屏障功能影響的實驗研究.pdf

1、目的：觀察重組人腸三葉因子（recombinant human intestinal trefoil factor, rhITF)對燒傷后小鼠腸黏膜屏障功能的影響并探討其可能的機制。
　　方法：按隨機數(shù)字表將270只成年BALB/c小鼠（體重20-25g）隨機分為正常對照（C）組，燒傷對照（B）組，燒傷+rhITF治療（B+I）組。C組只給予麻醉和剃毛，不予燒傷。B組給予90℃水燙傷7S，造成30％體表面積Ⅲ度燒傷[1]。傷后各組

2、均給予正常飲食及飲水；B+I組于燒傷后6h（麻醉清醒后）灌胃給予rhITF（1mg/kg.d），每天2次，B組灌胃等體積生理鹽水，每天2次。采用HE染色法觀察燒傷后12h、24h、48h、72h各組小鼠回腸組織形態(tài)學變化；采用組織化學染色法觀察燒傷后12h、24h、48h、72h各組小鼠回腸黏液化學性質(zhì)的變化；采用阿利新蘭結(jié)合法、考馬斯亮藍（G-250）法、酚磺法檢測燒傷后12h、24h、48h、72h各組小鼠回腸黏液厚度、黏液中黏蛋白

3、和己糖的含量；采用密度梯度離心法提取出小鼠腸上皮內(nèi)淋巴細胞（intra epithelial lymphocyte, IEL），通過流式細胞儀檢測燒傷后6h、12h、24h、72h各組IEL凋亡率的變化；采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測燒傷后12h、24h、48h、72h各組小鼠IEL培養(yǎng)上清中細胞因子IFN-γ和IL-4的含量。
　　結(jié)果：⑴與C組比較，B組出現(xiàn)明顯的病理變化，傷后12h腸黏膜水腫、毛細血管充血，絨毛縮短；傷

4、后24h腸黏膜細胞變性，絨毛塌陷，腸壁變?。粋?8h絨毛部分脫落，微絨毛消失；傷后72h絨毛斷裂、壞死、脫落，淋巴細胞浸潤，黏膜下充血水腫。與 B組比較，B+I組損傷不同程度減輕，主要表現(xiàn)為絨毛腫脹、黏膜充血水腫，毛細血管充血。⑵與C組比較，B組傷后腸黏膜中性黏液分泌增加，而酸性黏液尤其是硫酸化黏液分泌減少；與B組比較，B+I組分泌酸性黏液增加，而分泌中性黏液減少。⑶與C組比較，B組腸黏液厚度在傷后12h一過性增高，隨后逐漸降低（P<

5、0.01），腸黏液中黏蛋白含量在傷后12h輕度增加，隨后開始逐漸下降，傷后48、72h顯著低于傷前（P<0.01）；腸黏液中已糖的含量呈下降趨勢，傷后48、72h顯著低于傷前（P<0.01）。與B組比較，B+I組腸黏液厚度在第48h、72h明顯增高（P<0.01），腸黏液中黏蛋白含量兩組相差不顯著（P>0.05），腸黏液中的己糖含量升高，兩組在傷后48h、72h存在顯著差異(P0.01)。⑷與C組相比，B組各時相點IEL凋亡率均增加，傷

6、后12h顯著增加（P<0.01）。與B組相比，B+I組各時相點IEL凋亡率均減少。⑸與C組相比，B組各時相點IEL分泌IFN-γ的量均減少，尤其以燒傷后24h減少最為明顯（P<0.01），分泌IL-4的量在燒傷后12h一過性減少，但隨后立即增加，傷后72h具有顯著性差異（P<0.01）；與 B組相比，B+I組各時相點 IEL分泌IFN-γ的量在傷后均不同程度增加，而分泌IL-4的量有不同程度下降。
　　結(jié)論：①嚴重燒傷后腸黏膜黏液