人血液非對稱性二甲基精氨酸檢測方法及冠心病多參數(shù)輔助診斷模型的建立.pdf

1、背景和目的:
　　目前冠狀動脈造影技術(shù)作為冠心病(Coronary heart disease,CHD)診斷金標(biāo)準(zhǔn),屬于有創(chuàng)性診斷技術(shù),不良反應(yīng)較多;64層螺旋CT和雙源CT用于無創(chuàng)評價冠心病患者冠脈的病變情況,但價格昂貴,難以全面推廣和普及。有臨床流行病學(xué)調(diào)查表明血液非對稱性二甲基精氨酸分子(Asymmetric dimethylarginine,ADMA)含量增高可能為心血管疾病的危險因素,并且與冠心病危險程度相關(guān)。目前ADM

2、A分子的檢測方法不能滿足臨床檢測要求,限制了該分子的臨床應(yīng)用。我們研究團隊正在建立可用于臨床檢測該分子的酶聯(lián)免疫分析方法,本研究則建立測定ADMA分子的高效液相色譜方法,以期為酶聯(lián)免疫分析法檢測ADMA分子的試劑盒做評價,同時也可以為臨床檢測、研究該分子做準(zhǔn)備。同時,我們在35項血液生化指標(biāo)中尋找CHD組與非冠心病(Non-coronary heart disease,NCHD)組間的差異指標(biāo),建立診斷模型,以期用于行冠狀動脈造影檢查之

3、前的初篩,降低冠狀動脈沒有實質(zhì)性病變的人群行冠狀動脈造影的風(fēng)險。
　　對象與方法:
　　根據(jù)擬定的納入和排除標(biāo)準(zhǔn),選取研究對象398例,入選病例行冠狀動脈造影檢查分為CHD組(114例)和NCHD組(284例)并記錄Gensini積分,冠心病組根據(jù)冠狀動脈的病變支數(shù)分為單支病變組(Single-vessel CHD)、雙支病變組(Double-vessel CHD)和三支病變組(Three-vessel CHD),其中雙支病

4、變組和三支病變組統(tǒng)稱為多支病變組(Multi-vessel CHD)。
　　血清ADMA、對稱性二甲基精氨酸分子(Symmetric dimethylarginine,SDMA)采用高效液相色譜法檢測;35項生化指標(biāo)采用羅氏公司COBAS 8000全自動生化分析檢測。
　　使用SPSS 19.0軟件用于數(shù)據(jù)分析。正態(tài)定量數(shù)據(jù)兩組間比較用T檢驗,多組間比較采用方差分析;非正態(tài)或方差不齊的資料兩組間比較采用非參數(shù)U檢驗,多組間比

5、較采用非參數(shù)H檢驗,組間的兩兩比較采用推廣了的t檢驗。計數(shù)資料分析采用χ2檢驗。P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。35項指標(biāo)中篩選出差異指標(biāo)用于多因素Logistic回歸(Multivariate Logistic regression)和逐步判別分析(Stepwise discriminant analysis),建立區(qū)分CHD組與NCHD組數(shù)學(xué)分類模型。
　　結(jié)果:
　　一、建立了基于高效液相色譜技術(shù)的血清ADMA分子檢測方法,

6、可同時檢測精氨酸(Arginine,Arg)、高精氨酸(Homoarginine,H-Arg)及SDMA。4種待測標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線的決定系數(shù)R2>0.999;兩個水平的加樣回收率范圍88.7％~110.2%,且差異無統(tǒng)計學(xué)意義;批內(nèi)、批間變異系數(shù)分別低于5%和7%;最低檢測限Arg為0.02μmol/L,H-Arg、ADMA及SDMA為0.01μmol/L;最低定量限Arg為0.05μmol/L,H-Arg、ADMA及SDMA為0.03μ

7、mol/L。
　　二、ADMA和SDMA與CAG病變支數(shù)及Gensini積分的相關(guān)性分析。與NCHD組比較,CHD組ADMA與SDMA增高,具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。ADMA及SDMA在冠心病單支病變組、多支病變組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。ADMA及SDMA與冠脈病變支數(shù)及Gensini積分之間存在弱相關(guān),相關(guān)性檢驗有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　三、常規(guī)生化指標(biāo)在冠心病診斷中的價值評價。與NCHD組比較,ALT、GGT、TNT、UN、Cr、UA

8、、APOA1、P、HDL、LP(a)、Na及NTBNP共12項指標(biāo)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,而且TNT及NTBNP在多支病變組高于單支病變組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。利用SPSS19.0軟件對差異指標(biāo)進(jìn)行多因素分析,建立CHD組與NCHD組鑒別診斷模型。經(jīng)二元Logistic回歸分析,最終有5個參數(shù)(APOA1、P、LP(a)、Cr和GGT)進(jìn)入方程(Y=logit(P)=3.202-2.892*APOA1-1.603*P+0.012*GGT+0

9、.064*LP(a)+0.021*Cr),保存預(yù)測概率P,做ROC(Receiver operating characteristic,ROC)曲線分析,5個參數(shù)聯(lián)合檢測鑒別CHD組和NCHD組的曲線下面積(Area under curve,AUC)為0.766,敏感性為83.4%,特異性為57.0%;判別分析的入選參數(shù)同Logistic回歸分析一致,建立判別方程P=eb/(eb+ec)b=35.230*APOA1+25.825*P+0

10、.000*GGT+0.052*LP(a)+0.413*Cr-51.825c=38.260*APOA1+27.605*P-0.010*GGT+0.009*LP(a)+0.392*Cr-59.865保存預(yù)測概率P,做ROC曲線分析,AUC為0.762,敏感性為76.0%,特異性為66.7%。兩種多參數(shù)分析方法經(jīng)z-score檢驗,AUC無統(tǒng)計學(xué)差異。利用判別方程對398例研究對象重新診斷分組,總準(zhǔn)確度為67.9%,敏感性為66.5%,特異性

11、為69.3%。
　　結(jié)論:
　　建立了基于高效液相色譜技術(shù)的血清ADMA分子檢測方法,可同時檢測精氨酸(Arginine,Arg)、高精氨酸(Homoarginine,H-Arg)及SDMA分子。經(jīng)過系統(tǒng)的方法學(xué)評價表明,結(jié)果準(zhǔn)確,可用作比較ADMA分子檢測方法的參考,也可用于臨床檢測、研究該分子。CHD組血清ADMA、SDMA水平顯著高于NCHD組,且與冠狀動脈的病變程度、Gensini積分有一定的相關(guān)性,相關(guān)性檢驗有統(tǒng)計