非對稱性二甲基精氨酸對血管內(nèi)皮纖溶系統(tǒng)的調(diào)節(jié)及其細胞內(nèi)機制.pdf

1、背景：非對稱性二甲基精氨酸（asymmetric dimethylarginine，ADMA ）是一種內(nèi)源性一氧化氮合酶（NOS ）抑制劑，通過使一氧化氮（NO ）合成減少而引起內(nèi)皮功能障礙。研究表明，ADMA 合成增加或分解減少與血栓性心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，然而具體機制尚不明確。
　　 目的
　　 本研究將通過體外細胞培養(yǎng)，觀察ADMA 對血管內(nèi)皮細胞纖溶系統(tǒng)的主要調(diào)節(jié)因子即纖溶酶原激活物（tPA ）和纖溶酶原

2、激活物抑制物-1（PAI-1 ）的影響，并觀察各細胞內(nèi)信號通路在ADMA 對tPA、PAI-1 調(diào)節(jié)過程中所起的作用，以闡明ADMA 對血管內(nèi)皮纖溶系統(tǒng)的影響及探索其細胞內(nèi)機制。
　　 方法
　　 （1 ）體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC ）至3-5代，分別用單純培養(yǎng)基、不同濃度ADMA（3、10、30 μ mol/L ）培養(yǎng)不同時間（6、24、48 小時）；（2 ）HUVEC分為單純培養(yǎng)基對照組，ADMA 組，ι

3、-arginine 組，MAPK（ERK1/2、JNK、p38 MAPK ）阻斷劑組，NF-κ B阻斷劑組，ι -arginine、MAPK 阻斷劑、NF-κ B 阻斷劑分別與ADMA 共同作用組。通過以上培養(yǎng)后，采用ELISA 法檢測tPA和PAI-1的蛋白濃度以及NF-κ B DNA 結(jié)合活性；采用實時定量RT-PCR 法檢測tPA和PAI-1的mRNA 水平；采用western blot 法檢測MAPK 磷酸化水平。
　　

4、 結(jié)果
　　 （1 ）ADMA 明顯降低HUVEC tPA的蛋白水平，作用呈時間和濃度依賴性，其中30 μ mol/L ADMA 作用48 小時對tPA 蛋白的抑制作用最顯著（對照組 109.01±4.15ng/ml vsADMA 組 86.76±5.95ng/ml, p<0.01 ）；30 μ mol/L ADMA 亦顯著降低tPA mRNA 水平。
　　 （2 ）30 μ mol/L ADMA 使HUVEC PAI-

5、1 蛋白水平明顯增加，作用呈時間依賴性，其中30 μ mol/LADMA 作用48 小時對PAI-1 蛋白的促進作用最顯著（對照組 2721.12±278.02ng/ml vs ADMA組 3435.78±22.33ng/ml, p<0.05 ）；30 μ mol/L ADMA 亦顯著增加PAI - 1 mRNA 水平。
　　 （3 ）一氧化氮合成前體ι -arginine、p38 MAPK 阻斷劑SB203580和NF-κ B