整合子相關的細菌多重耐藥性研究.pdf

1、目的：多重耐藥是一個全球性的問題，其嚴重后果是影響臨床療效，增加治療成本，縮短新藥的應用周期，增大新藥的研究與開發(fā)成本，直接威脅著人體健康。近年來，抗生素耐藥機制的分子特征新進展闡明了整合子(integron)基因結(jié)構(gòu)的存在，細菌通過整合子-基因盒(Genecassette)系統(tǒng)，在整合酶的作用下，捕獲外來耐藥基因，并在位于整合子上游的啟動子作用下表達，使細菌具有耐藥及多重耐藥性。本研究旨在了解昆明地區(qū)革蘭陰性桿菌臨床多重耐藥菌株中整合

2、子的攜帶情況，研究整合子與多重耐藥的關系，為進一步明確細菌多重耐藥的新機制奠定基礎。 方法：1對昆明地區(qū)臨床常見革蘭陰性桿菌進行藥物敏感性分析；2運用PCR、Southern雜交等分子生物學方法檢測臨床菌株中整合子的相關基因；3質(zhì)粒轉(zhuǎn)化和耐藥性轉(zhuǎn)移的分析。 結(jié)果：1臨床菌株多為對三種或三種以上抗生素耐藥的多重耐藥菌株。2針對整合子保守序列CS的擴增陽性率為30％～50％，intI1整合酶基因的陽性率很高(80％～97％)

3、；intI2整合酶基因僅在銅綠假單胞菌和陰溝腸桿菌中檢出，陽性率分別為6.25％和13.5％；1類整合子的3′保守區(qū)的sul1基因的陽性率為＞90％;qacE△1基因的陽性率為＞80％，aadB的陽性率為10％～50％。Southern雜交證實了1類整合子的intIl、sul1和qacE△1基因。3轉(zhuǎn)化子的生化反應與受體菌相似，經(jīng)VITEK2鑒定為大腸埃希菌，而轉(zhuǎn)化子的耐藥譜與原始菌相似。結(jié)論：細菌的多重耐藥與整合子密切相關，整合子相關

4、基因在不同種屬的菌之間都有很高的同源性；sul1基因和qacE△1可作為1類整合子的標志基因；整合子可能由質(zhì)粒攜帶，整合子所攜帶的耐藥基因可能通過轉(zhuǎn)化實驗性地進行轉(zhuǎn)移。目的：AmpC酶是革蘭陰性桿菌所產(chǎn)生的染色體介導的頭孢菌素酶，由ampC基因編碼，能使包括第三代頭孢菌素在內(nèi)的許多β內(nèi)酰胺類抗生素失活。本研究旨在建立臨床實驗室常規(guī)檢測產(chǎn)AmpC酶的有效方法；并分析AmpC酶結(jié)構(gòu)基因ampC和調(diào)控基因ampD在整合子中可能存在的位置，探

5、尋AmpC酶基因與整合子的關系，分析細菌耐藥機理和指導臨床合理應用抗菌藥物，為臨床治療產(chǎn)酶菌引起的感染提供理論依據(jù)。 方法：五種AmpC酶的檢測方法(頭孢西丁敏感試驗、表型篩選試驗、氟氯西林(FCC)雙抑制劑擴散協(xié)同試驗、三維試驗和AmpC酶的基因檢測)，PCRmapping法分析AmpC酶結(jié)構(gòu)基因ampC和調(diào)控基因ampD在整合子中可能存在的位置。 結(jié)果：AmpC酶的檢測表明，陰溝腸桿菌和銅綠假單胞菌的頭孢西丁篩選試驗

6、陽性率都為100％；五個紙片表型篩選試驗陽性率分別為35.1％(26/74)和37.5％(30/80)；氟氯西林雙抑制劑擴散協(xié)同試驗陽性率分別為37.8％(28/74)和40％(32/80)；三維試驗的陽性率分別為28.4％(21/74)和30％(24/80)；基因擴增ampC基因的陽性率分別為89.2％(66/74)和91％(73/80)；ampD基因的陽性率分別為86.5％(64/74)和87.5％(70/80)。PCRmappin