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文檔簡介
1、目的:多重耐藥是一個全球性的問題,其嚴重后果是影響臨床療效,增加治療成本,縮短新藥的應用周期,增大新藥的研究與開發(fā)成本,直接威脅著人體健康。近年來,抗生素耐藥機制的分子特征新進展闡明了整合子(integron)基因結(jié)構(gòu)的存在,細菌通過整合子-基因盒(Genecassette)系統(tǒng),在整合酶的作用下,捕獲外來耐藥基因,并在位于整合子上游的啟動子作用下表達,使細菌具有耐藥及多重耐藥性。本研究旨在了解昆明地區(qū)革蘭陰性桿菌臨床多重耐藥菌株中整合
2、子的攜帶情況,研究整合子與多重耐藥的關系,為進一步明確細菌多重耐藥的新機制奠定基礎。 方法:1對昆明地區(qū)臨床常見革蘭陰性桿菌進行藥物敏感性分析;2運用PCR、Southern雜交等分子生物學方法檢測臨床菌株中整合子的相關基因;3質(zhì)粒轉(zhuǎn)化和耐藥性轉(zhuǎn)移的分析。 結(jié)果:1臨床菌株多為對三種或三種以上抗生素耐藥的多重耐藥菌株。2針對整合子保守序列CS的擴增陽性率為30%~50%,intI1整合酶基因的陽性率很高(80%~97%)
3、;intI2整合酶基因僅在銅綠假單胞菌和陰溝腸桿菌中檢出,陽性率分別為6.25%和13.5%;1類整合子的3′保守區(qū)的sul1基因的陽性率為>90%;qacE△1基因的陽性率為>80%,aadB的陽性率為10%~50%。Southern雜交證實了1類整合子的intIl、sul1和qacE△1基因。3轉(zhuǎn)化子的生化反應與受體菌相似,經(jīng)VITEK2鑒定為大腸埃希菌,而轉(zhuǎn)化子的耐藥譜與原始菌相似。結(jié)論:細菌的多重耐藥與整合子密切相關,整合子相關
4、基因在不同種屬的菌之間都有很高的同源性;sul1基因和qacE△1可作為1類整合子的標志基因;整合子可能由質(zhì)粒攜帶,整合子所攜帶的耐藥基因可能通過轉(zhuǎn)化實驗性地進行轉(zhuǎn)移。目的:AmpC酶是革蘭陰性桿菌所產(chǎn)生的染色體介導的頭孢菌素酶,由ampC基因編碼,能使包括第三代頭孢菌素在內(nèi)的許多β內(nèi)酰胺類抗生素失活。本研究旨在建立臨床實驗室常規(guī)檢測產(chǎn)AmpC酶的有效方法;并分析AmpC酶結(jié)構(gòu)基因ampC和調(diào)控基因ampD在整合子中可能存在的位置,探
5、尋AmpC酶基因與整合子的關系,分析細菌耐藥機理和指導臨床合理應用抗菌藥物,為臨床治療產(chǎn)酶菌引起的感染提供理論依據(jù)。 方法:五種AmpC酶的檢測方法(頭孢西丁敏感試驗、表型篩選試驗、氟氯西林(FCC)雙抑制劑擴散協(xié)同試驗、三維試驗和AmpC酶的基因檢測),PCRmapping法分析AmpC酶結(jié)構(gòu)基因ampC和調(diào)控基因ampD在整合子中可能存在的位置。 結(jié)果:AmpC酶的檢測表明,陰溝腸桿菌和銅綠假單胞菌的頭孢西丁篩選試驗
6、陽性率都為100%;五個紙片表型篩選試驗陽性率分別為35.1%(26/74)和37.5%(30/80);氟氯西林雙抑制劑擴散協(xié)同試驗陽性率分別為37.8%(28/74)和40%(32/80);三維試驗的陽性率分別為28.4%(21/74)和30%(24/80);基因擴增ampC基因的陽性率分別為89.2%(66/74)和91%(73/80);ampD基因的陽性率分別為86.5%(64/74)和87.5%(70/80)。PCRmappin
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