eb病毒潛伏膜蛋白在慢性萎縮性胃炎伴腸化黏膜中的表達(dá)及意義

1、EB病毒潛伏膜蛋白1在慢性萎縮性胃炎伴腸化黏膜中的表達(dá)及意義,姓名：張廷光 方向：消化系病 導(dǎo)師：劉希雙 教授,主要內(nèi)容,研究背景 實(shí)驗(yàn)過程 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 討論 結(jié)論

2、 攻讀學(xué)位間取得的成果 致謝,研究背景 慢性萎縮性胃炎 是我國比較常見的胃粘膜病變，常伴不同程度的腸上皮化生，是一種重要的胃癌前疾病。隨著對(duì)胃癌研究的不斷深入，生物因素在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用越來越受到重視，而作為生物致癌因素的EB病毒近年來已成為胃癌發(fā)病方面的研究熱點(diǎn)，在過去十年里，EB病毒在胃癌發(fā)病過程中的作用不斷被發(fā)現(xiàn)新的證據(jù)。,EB 病毒與多種惡性腫瘤密切相

3、關(guān)，已被WHO認(rèn)定為Ⅰ類致癌病原體，在人體內(nèi)常處于潛伏感染狀態(tài)，可以致機(jī)體表達(dá)多種與其潛伏感染密切相關(guān)的病毒蛋白，其中潛伏膜蛋白1（LMP1）是其潛伏感染的主要指標(biāo)，也是唯一被公認(rèn)的能夠促進(jìn)細(xì)胞癌變和轉(zhuǎn)移的具有瘤基因功能的EBV編碼的基因產(chǎn)物。,研究背景,研究背景,越來越多的研究結(jié)果表明，EBV感染與胃癌發(fā)生有關(guān)，但其具體機(jī)制目前尚不清楚。EBV相關(guān)性胃癌在EBV相關(guān)惡性腫瘤中占重大比重，因此研究其在胃癌發(fā)病過程中的作用具有極其重要的

4、意義。,檢測EBV潛伏膜蛋白1在作為癌前疾病的慢性萎縮性胃炎伴腸化黏膜中的表達(dá)，探討其在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。,研究目的,144例胃粘膜標(biāo)本全部取自2012年6月— 2013年6月期間來我院檢查和治療的病人45例CSG、63例CAG伴腸化黏膜標(biāo)本均取 自來我院行胃鏡檢查的病人36例胃癌標(biāo)本均取自我院外科手術(shù)病人,研究對(duì)象,研究對(duì)象,入選標(biāo)準(zhǔn)慢性淺表性胃炎納入標(biāo)準(zhǔn): ① 胃鏡下表現(xiàn):胃竇黏膜 紅白相間

5、，以紅為主， 黏膜較光滑。 ②取活檢病理學(xué)診斷： 慢性淺表性胃炎。,研究對(duì)象,CAG 伴腸化納入標(biāo)準(zhǔn)： ① 胃鏡下表現(xiàn)：胃竇粘膜 粗糙，粘膜紅白相間，以 白為主，粘膜變薄，粘膜 下血管網(wǎng)清晰可見。 ②病理學(xué)診斷：CAG伴腸化。,研究對(duì)象,3.胃癌納入標(biāo)準(zhǔn)： ①術(shù)前胃鏡檢查，取活檢行病理學(xué)診斷示胃腺癌。 ②術(shù)后切除病灶送檢病理學(xué)診斷結(jié)果為胃腺癌。,研究對(duì)象,CSG及CAG伴腸化黏膜

6、標(biāo)本采集：胃鏡直視下用活檢鉗于胃竇處取活檢組織2-3塊胃癌組織采集：于我院病理科取胃癌患者送檢胃癌組織2-3塊標(biāo)本取完立即甲醛固定，12h內(nèi)石蠟包埋。,免疫組織化學(xué)SP試劑盒(上海金杉生物科技有限公司) LMP-1單克隆抗體(即用型)（上海金杉生物科技有限公司）脫石蠟劑：二甲苯 （dimethylbe nzene）復(fù)染劑：蘇木素(haematoxylin)磷酸鹽緩沖液（PBS）無水乙醇（absolutea lcohol

7、） 雙氧水(aquae hydrogeniidioxidi)以及載玻片等。,試劑及來源,石蠟包埋機(jī)（Thermo ELECTRON CORPORATION SHAN DON HISTOCENTRE3） 冷凍工作臺(tái)（孝感泰康達(dá)醫(yī)療設(shè)備有限公司制造）化蠟機(jī)（SHAN DON PARA TRIMMER） 切片機(jī)(LEICA RM2135 GERMANY) 烤片機(jī)（LEICA HI1220 GERMANY）

8、恒溫培養(yǎng)箱（山東濰坊精鷹醫(yī)療器械有限公司） BX51全自動(dòng)顯微照相系統(tǒng)（日本OLYMPUS公司） 顯微鏡（V-TV1X-2日本OLYMPUS公司） 日本OLYMPUS EVIS240系列電子內(nèi)鏡 Pentax公司3500系列電子內(nèi)鏡 Wilson-cook胃鏡活檢鉗,主要設(shè)備及來源,石蠟切片梯度脫蠟水化胰酶抗原修復(fù)過氧化氫溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性滴加一抗、二抗DAB顯色蘇木素復(fù)染二甲苯透明

9、，中性樹膠封片，顯微鏡下觀PBS溶液代替一抗作為陰性對(duì)照，結(jié)果為陰性，無顯色反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：陽性反應(yīng)為棕黃色,免疫組化主要步驟,以細(xì)胞染色程度及范圍做以下評(píng)分 : ①著色強(qiáng)度：無著色為0，淺黃色1，棕黃色2，棕褐色3。 ②陽性細(xì)胞面積:無著色為0，著色面積2/3為3，兩項(xiàng)結(jié)果相加≥3為陽性。,結(jié)果判定,采用 SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，用所得數(shù)據(jù)建立數(shù)據(jù)庫，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05有統(tǒng)

10、計(jì)學(xué)意義。,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,SP免疫組化染色EBV-LMP1在CSG及胃癌組織中的表達(dá),,A. CSG中EBV-LMP1陰性表達(dá)（X100) B.胃Ca中EBV-LMP1陰性 表達(dá)（X100）,,,結(jié)果,A,B,結(jié)果EBV-LMP1在CAG伴腸化黏膜中的表達(dá),EBV-LMP1在CAG伴腸化黏膜陽性 表達(dá)（X400）,C,D,.,,.,討論,CAG和腸上皮化生是比較常見的胃癌前狀態(tài)。 國內(nèi)外學(xué)者普遍認(rèn)為胃癌的發(fā)生經(jīng)歷CSG→

11、 CAG →腸上皮化生→不典型型增生→胃癌幾 個(gè)階段，其中向胃癌轉(zhuǎn)變過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是腸上皮化生。因此在CAG伴腸化階段檢測相關(guān)指標(biāo)，及早采取措施，對(duì)早期胃癌的預(yù)防、發(fā)現(xiàn)、治療及其預(yù)后具有重要意義。,討論,隨著對(duì)EB病毒研究的不斷深入，近年來發(fā)現(xiàn)其與胃癌的發(fā)生也有密切關(guān)系。其導(dǎo)致胃癌發(fā)生的主要致瘤蛋白是EB病毒LMP1。 EB病毒LMP1是一個(gè)跨膜蛋白，由386個(gè)氨基酸殘基組成，是EB病毒編碼的主要致瘤蛋白，現(xiàn)有研究已證明其具

12、有促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化和永生化、介導(dǎo)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞分化和凋亡、促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移等多種生物學(xué)活性。,討論,EB病毒LMP1在胃癌發(fā)病過程中的重要作用已被證實(shí)，但在由CSG向胃癌發(fā)展的過程中LMP1主要在哪一期起作用，目前尚不清楚，在本研究中，EB病毒LMP1在CAG 伴腸化黏膜中的表達(dá)遠(yuǎn)高于CSG及胃癌組織，而腸化又是向胃癌發(fā)展過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，據(jù)此推測，EB病毒LMP1主要在胃癌形成早期起作用，胃癌形成以后可能會(huì)關(guān)閉LMP1基因表達(dá)，通過降低

13、免疫原性去促進(jìn)腫瘤生長，而不是依賴LMP1介導(dǎo)的細(xì)胞增殖效應(yīng)。,討論,盡管目前在對(duì)EBV與胃癌關(guān)系的研究中取得了較大進(jìn)展，但EBV是如何進(jìn)入胃黏膜上皮細(xì)胞的？EBV的存在是胃癌發(fā)生的原因還是胃癌變化過程中的結(jié)果？引起胃癌發(fā)生的具體分子機(jī)制是什么？這些問題目前尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。,結(jié)論,CAG 伴腸化組織中存在EB病毒LMP1表達(dá)，其表達(dá)率明顯高于CSG及胃癌組織，提示EB病毒感染可能在胃癌發(fā)生早期階段起重要作用。,攻讀學(xué)位間的研究

14、成果,張廷光 劉希雙 郝正魁 孫學(xué)國等 EB病毒潛伏膜蛋白1在慢性萎縮性胃炎伴腸化黏膜中的表達(dá)及意義[J] .中國醫(yī)師進(jìn)修雜志 ,2014,37(13):30-33.,致謝,值此論文完成之際，首先我要感謝我的導(dǎo)師劉希雙教授三年來對(duì)我的辛勤培養(yǎng)和教育。導(dǎo)師淵博的學(xué)識(shí)、精湛的醫(yī)術(shù)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度、高尚的道德情操、精益求精的工作作風(fēng)讓我受益終生，他將是我在未來從醫(yī)生涯中的一桿標(biāo)尺，一盞明燈。本研究是在劉老師的悉心指導(dǎo)下完成的，從課題的選擇到最

15、終完成，導(dǎo)師給予我巨大的幫助。我將牢記恩師的教誨，在以后的工作與學(xué)習(xí)中不斷努力，不辜負(fù)恩師對(duì)我辛勤的培養(yǎng)和期望！  衷心感謝青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院胃鏡室各位老師在我病例采集過程中給予的支持和幫助！衷心感謝青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院消化內(nèi)科全體老師三年來在學(xué)習(xí)和生活上給予的無私幫助和支持，正是她們的無私奉獻(xiàn)，才讓我們知識(shí)飽滿！衷心感謝我的師弟姜坤同學(xué)在我試驗(yàn)過程中給予的無私幫助！最后，衷心的感謝三年來所有關(guān)心和幫助過我的師長和