2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、衰老是細(xì)胞脫離細(xì)胞周期并不可逆地喪失增殖能力后進(jìn)入一種相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)。自Hayflick等首次從人類(lèi)纖維原細(xì)胞發(fā)現(xiàn)衰老現(xiàn)象后,人們逐漸發(fā)現(xiàn)人類(lèi)其它各類(lèi)細(xì)胞和其它物種的纖維細(xì)胞也存在著衰老。細(xì)胞發(fā)生衰老以后主要表現(xiàn)在細(xì)胞周期的改變、13.半乳糖苷酶活性的變化、線(xiàn)立體的皺縮與衰老基因的表達(dá)增加等。細(xì)胞衰老可以促進(jìn)生物衰老,不僅與腫瘤發(fā)生有關(guān),而且與心力衰竭、動(dòng)脈粥樣硬化、心律失常等心血管疾病發(fā)生有著密切的關(guān)系。因此,深入研究衰老的機(jī)制有著重

2、要意義。 缺氧-氧再灌注是細(xì)胞、組織與器官最常見(jiàn)的損傷因素,也是誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生衰老的常見(jiàn)方法。最近國(guó)外有研究顯示缺氧與氧再灌可以使骨髓造血細(xì)胞發(fā)生衰老。 他汀類(lèi)藥物通過(guò)抑制3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶的活性而抑制膽固醇的合成,常用來(lái)治療高膽固醇血癥,他汀類(lèi)藥物還可降低冠心病患者的死亡率、提高心臟移植患者的生存率、改善心肌重構(gòu)等作用。除了調(diào)節(jié)膽固醇代謝外,最近Assmus等報(bào)道他汀類(lèi)藥物可通過(guò)上調(diào)細(xì)胞周期蛋白,下調(diào)細(xì)胞周期抑

3、制因子p27K<'kipl>,抑制內(nèi)皮祖細(xì)胞的衰老。Pravastatin除了心血管保護(hù)作用給患者帶來(lái)的益處外,是否同時(shí)具有抑制缺氧/氧再灌注誘導(dǎo)心肌細(xì)胞衰老,對(duì)心臟產(chǎn)生保護(hù)作用呢? 在本研究中,將了解缺氧/氧再灌注是否能誘導(dǎo)培養(yǎng)SD乳大鼠心肌細(xì)胞發(fā)生衰老;研究缺氧/氧再灌注誘導(dǎo)培養(yǎng)SD乳大鼠心肌細(xì)胞發(fā)生衰老的機(jī)制;并擬采用pravastatin對(duì)缺氧/氧再灌注誘導(dǎo)SD乳大鼠心肌細(xì)胞的衰老進(jìn)行干預(yù),觀(guān)察細(xì)胞周期與β-半乳糖苷酶活

4、性等經(jīng)典的細(xì)胞衰老指標(biāo)的變化,以探討pravastatin是否對(duì)心肌細(xì)胞衰老有抑制作用及可能機(jī)制。 第一部分 SD乳大鼠心肌細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定與缺氧/氧再灌注誘導(dǎo)建立SD乳大鼠心肌細(xì)胞衰老模型 目的:在成功分離、培養(yǎng)SD乳大鼠心肌細(xì)胞的基礎(chǔ)上,探討獲得較純心肌細(xì)胞的方法以及采用缺氧/氧再灌注誘導(dǎo)建立SD乳大鼠心肌細(xì)胞衰老模型的可行性。 方法:采用胰蛋白酶消化心肌組織分離單個(gè)心肌細(xì)胞,聯(lián)合差速貼壁與培養(yǎng)基中加入Brd

5、u殺死心肌成纖維細(xì)胞。心肌細(xì)胞在含1%O<.2>與99%N2的孵育箱中缺氧培養(yǎng)6 h,在21%02與5%CO<,2>孵育箱中進(jìn)行氧再灌注培養(yǎng)24和48 h,建立心肌細(xì)胞衰老模型。采用免疫組化檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞α-actin表達(dá)情況;透射電鏡觀(guān)察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變:BrdU摻入試驗(yàn)了解心肌細(xì)胞增殖情況;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期;β-半乳糖苷酶試劑盒檢測(cè)β-半乳糖苷酶活性。 結(jié)果:經(jīng)α-actin抗體鑒定顯示分離培養(yǎng)的細(xì)胞中95%以上是心

6、肌細(xì)胞。心肌細(xì)胞經(jīng)缺氧/氧再灌注誘導(dǎo)后,細(xì)胞體積變大、線(xiàn)立體明顯皺縮。 細(xì)胞增殖結(jié)果顯示缺氧/氧再灌注組心肌細(xì)胞Brdu陽(yáng)性率較對(duì)照組有顯著下降(P<0.01);細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示缺氧/氧再灌注組心肌細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞較對(duì)照組有顯著增多(P<0.01),S期細(xì)胞較對(duì)照組有顯著減少(P<0.01);α-半乳糖苷酶活性檢測(cè)結(jié)果顯示氧再灌注組心肌細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性較對(duì)照組與缺氧6 h有顯著提高(P<0.01)。 結(jié)論:

7、 1.采用胰蛋白酶消化心肌組織分離心肌細(xì)胞,聯(lián)合差速貼壁與培養(yǎng)基中加入Brdu殺死心肌成纖維細(xì)胞,可以獲得較純的心肌細(xì)胞,經(jīng)α-actin抗體鑒定顯示分離培養(yǎng)的細(xì)胞中95%以上是心肌細(xì)胞。 2.我們首次采用缺氧/氧再灌注,成功誘導(dǎo)建立了SD乳大鼠心肌細(xì)胞衰老模型,為心肌細(xì)胞衰老機(jī)制的研究提供了穩(wěn)定可靠的模型。 第二部分 缺氧/氧再灌注誘導(dǎo) SD 乳大鼠心肌細(xì)胞衰老的機(jī)制研究 目的:從細(xì)胞周期調(diào)控方面探討缺

8、氧/氧再灌注誘導(dǎo) SD 乳大鼠心肌細(xì)胞衰老的分子機(jī)制 方法:采用teal-time quantitative PCR與western blot方法檢測(cè)培養(yǎng)SD乳大鼠心肌細(xì)胞在對(duì)照組、缺氧6 h、氧再灌注24和48 h,心肌細(xì)胞周期相關(guān)蛋白(D1),細(xì)胞周期依賴(lài)激酶(CDK4),細(xì)胞周期蛋白和細(xì)胞周期依賴(lài)激酶復(fù)合物抑制劑(p21WAF1,p16IN4Ka),Rb蛋白,p53等基因的mRNA與蛋白水平的表達(dá)變化。 結(jié)果:

9、 (1)Cyclin D1與β-actin基因mRNA水平的比值在缺氧6 h、氧再灌注24和48 h分別為O.024,O.082,0.092,與對(duì)照組0.005相比有顯著增高(P

10、基因mRNA水平比值在缺氧6 h、氧再灌注24和48 h,分別為O.008,0.005,O.005與對(duì)照組O.011相比有顯著降低(P

11、RNA水平比值在缺氧6 h、氧再灌注24和48 h,分別為0.009,O.009,0.012與對(duì)照組O.006相比有顯著增高(P

12、RNA水平比值在缺氧6 h、氧再灌注24和48 h,分別為O.002,0.003,0.004與對(duì)照組0.001相比有顯著增高(P

13、,O.003,與對(duì)照組O.002相比有顯著增高(P

14、照組0.001相比有顯著增高(P

15、對(duì)缺氧/氧再灌注誘導(dǎo)SD乳大鼠心肌細(xì)胞衰老的干預(yù)研究 目的:了解pravastatin對(duì)缺氧/氧再灌注誘導(dǎo)SD乳大鼠心肌細(xì)胞衰老是否有抑制作用及其機(jī)制。 方法:Pravastatin干預(yù)濃度為lO<'-7>-10<'-5>mol/1,方法參考第一部分方法。 結(jié)果:Pravastatin干預(yù)后對(duì)照組、缺氧6 h、氧再灌注24和48 h的G0/G1期細(xì)胞分別為71.98%,86.47%,84.98%,88.78%較實(shí)

16、驗(yàn)組72.71%,87.45%,87.97%,89.78%沒(méi)有明顯減少(P>O.05),同樣對(duì)照組、缺氧6 h、氧再灌注24和48 h的S期細(xì)胞分別為20.34%,9.02%,6.06%,5.79%較實(shí)驗(yàn)組20.03%,9.01%,5.06%,4.93%沒(méi)有明顯增多(P>O.05). Pravastatin干預(yù)后,對(duì)照組、缺氧6 h、氧再灌注24和48 h的半乳糖苷酶活性陽(yáng)性細(xì)胞分別為9.13%,12.55%,42.15%,53.48%

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