SARS冠狀病毒N蛋白的細(xì)胞定位及其RNA干擾研究.pdf

1、　　本文旨在構(gòu)建增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)與SARS冠狀病毒不同長(zhǎng)度核衣殼蛋白區(qū)段融合表達(dá)的pEGFP-C1重組載體，對(duì)293細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，顯微鏡下觀察核衣殼蛋白不同區(qū)段在細(xì)胞內(nèi)的定位；構(gòu)建增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)與SARS冠狀病毒(SARS-CoV)各結(jié)構(gòu)蛋白的融合表達(dá)載體以及各結(jié)構(gòu)基因的短發(fā)夾狀RNA(shRNA)表達(dá)載體，將兩種重組載體共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞后觀察shRNA對(duì)SARS冠狀病毒結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)的影響，結(jié)果表明，本

2、研究成功構(gòu)建了含SARS冠狀病毒不同長(zhǎng)度N基因片段的重組pEGFP-C1載體。SARS-CoV核衣殼蛋白全長(zhǎng)位于細(xì)胞質(zhì)，其N1段(第1-187aa)位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，N2段(第161-423aa)定位于細(xì)胞質(zhì)。成功構(gòu)建了含SARS冠狀病毒各結(jié)構(gòu)基因的重組pEGFP-C1載體及針對(duì)各結(jié)構(gòu)基因的shRNA載體。不同序列的shRNA基因沉默效應(yīng)也不同。針對(duì)SARS冠狀病毒N基因的shRNA質(zhì)粒pshRNA-N1能顯著地抑制N蛋白的表達(dá)，并且