腸易激綜合征腹瀉型模型大鼠腸神經(jīng)系統(tǒng)(ENS)神經(jīng)元的改變及檢測ENS神經(jīng)元方法的評價.pdf

1、研究背景與目的：腸易激綜合征（IBS）是一種以腹痛或腹部不適伴排便異常為特征的功能性腸病，腹瀉型IBS（IBS-D）是其中最常見的類型，其發(fā)病機制尚不十分清楚。多數(shù)研究關注IBS-D存在的動力異常和內臟高敏，但腸神經(jīng)系統(tǒng)（ENS）調控的腸道分泌功能的改變在其發(fā)病中也可能有重要作用。本研究目的：觀察慢急性聯(lián)合應激IBS-D模型大鼠腸道動力的改變，評價其腹瀉程度；檢測IBS-D大鼠腸道粘膜下神經(jīng)叢（SMP）和肌間神經(jīng)叢（MP）神經(jīng)元總數(shù)以及

2、ChAT、VIP、NOS和Calretinin4種特異性標記物所標記的神經(jīng)元（以下簡稱特異性或陽性神經(jīng)元）的變化，結合本模型大鼠腸道動力改變，從ENS水平推斷神經(jīng)元改變的作用；比較切片法（whole sectioning method）和鋪片法（whole mount tissue）檢測大鼠ENS神經(jīng)元結果的差異，評價切片法在研究ENS神經(jīng)元中的應用價值。
　　 材料與方法：建立慢急性聯(lián)合應激IBS-D大鼠模型，評價其體重和腸道

3、傳輸功能的改變。留取大鼠腸道標本分別制作回腸、結腸SMP和MP全層鋪片標本和切片標本。應用免疫組織熒光雙染法檢測鋪片和切片標本SMP和MP神經(jīng)元總數(shù)以及ChAT、VIP、NOS和Calretinin陽性神經(jīng)元數(shù)目、陽性神經(jīng)元比例等指標，評價IBS-D模型大鼠ENS神經(jīng)元的改變；比較切片法和鋪片法檢測SMP和MP神經(jīng)元結果的一致性。
　　 結果：研究發(fā)現(xiàn)：（1）慢急性聯(lián)合應激處理后大鼠體重增長緩慢（240±12g vs。262±1

4、7g，P<0.05，n=8），腸道傳輸加快（60.6±5.3％vs.50.8±9.9％，P<0.05，n=7），模型大鼠具有IBS-D的部分特征。（2）IBS-D大鼠SMP和MP神經(jīng)元均存在改變，表現(xiàn)為回腸SMP神經(jīng)元總數(shù)（68.5±6.0 vs.62.1±4.4，P<0.05，n=8）、神經(jīng)節(jié)總數(shù)（22.9±2.3 vs.19.9±2.2，P<0.05，n=8）和ChAT陽性神經(jīng)元的數(shù)目（82.1±4.3％vs.76.0±5.0％，P

5、<0.05，n=8）均顯著增多；回腸和結腸SMP的VIP陽性神經(jīng)元的比例顯著增高（40.5±5.9％vs.28.9±3.7％，P<0.01，n=762.2±6.2％vs.55.4±5.4％，P<0.05，n=7）；NOS陽性神經(jīng)元的比例在結腸SMP增高（15.0±4.0％vs.10.5±2.9％，P<0.05），而在回腸和結腸的MP則顯著降低（23.3±4.5％vs.32.4±4.5％，P<0.01，n=7；18.1±3.7％vs.25

6、.5±5.5％，P<0.05，n=7）；結腸MP的Calretinin陽性神經(jīng)元的比例明顯增高（17.2±3.2％vs。13.4±2.9％，P<0.05）。IBS-D大鼠SMP分泌運動神經(jīng)元2種主要興奮性神經(jīng)遞質Ach和VIP增多，可能導致ENS促進腸道分泌作用加強；MP中NOS陽性的抑制性神經(jīng)元的減少表明ENS對肌肉的抑制作用可能減弱。（3）腸道切片標本顯示SMP神經(jīng)元數(shù)較少，陽性神經(jīng)元的比例均高于鋪片標本。鋪片和切片標本中MP中回腸

7、VIP和結腸Calretinin陽性神經(jīng)元的比例存在顯著差異，其他結果的一致性較好。
　　 結論：慢急性聯(lián)合應激大鼠可模擬IBS-D腸道功能異常等特征。模型大鼠回腸SMP神經(jīng)元總數(shù)增加、回腸或/和結腸ChAT陽性、VIP陽性分泌運動神經(jīng)元增多，ENS促進腸道分泌作用可能加強；MP抑制性神經(jīng)元（NOS-IR陽性神經(jīng)元）減少提示ENS對腸道肌肉運動的抑制作用可能減弱，腸道運動加快。表明在慢急性聯(lián)合應激誘發(fā)的IBS-D模型大鼠，ENS