雌激素對中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后Nogo-A陽性神經(jīng)元的影響.pdf

1、背景：眾所周知，高等脊椎動物成熟期CNS損傷后難以再生恢復(fù)，推測其原因可能有以下幾種：中樞神經(jīng)元本身再生能力有限；CNS內(nèi)的神經(jīng)元所生存的外部微環(huán)境中存在大量再生抑制因子的影響；損傷局部膠質(zhì)細(xì)胞形成致密的瘢痕妨礙軸突生長穿過。目前認(rèn)為外部微環(huán)境是影響再生的主要因素。近年來，與CNS神經(jīng)元外部微環(huán)境有關(guān)的軸突再生抑制蛋白引起科學(xué)家的廣泛關(guān)注。Nogo-A被認(rèn)為是最為重要的一種軸突再生抑制因子，它的發(fā)現(xiàn)使人們對成熟CNS神經(jīng)元損傷后軸突再生

2、的停滯有了新的認(rèn)識，為藥物治療CNS內(nèi)神經(jīng)元損傷帶來了新的希望。雌激素對CNS內(nèi)的多種損傷，如局灶性腦缺血、腦卒中等有明確的保護作用，對于CNS損傷后膽堿能纖維再生亦有明顯的促進作用；植物雌激素是近些年提出具有類似動物雌激素作用的雌激素類藥物替代物，對CNS同樣有類似于雌激素的作用。雖然大量的研究都提示雌激素在CNS損傷的轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮著類似于神經(jīng)營養(yǎng)物質(zhì)的作用，但關(guān)于雌激素和植物雌激素在CNS損傷過程中對中樞神經(jīng)的保護作用的機制及與Nog

3、o-A的關(guān)系還不是很清楚。 目的：本課題采用去卵巢和穹窿海馬傘切斷兩種CNS神經(jīng)元退變和損傷模型，以Nogo-A免疫組織化學(xué)和乙酰膽堿酯酶(AchE)組織化學(xué)染色方法，觀察去卵巢、隔海馬通路損傷與雌激素、植物雌激素替代治療之后大鼠基底前腦和海馬亞區(qū)Nogo-A陽性神經(jīng)元的變化及海馬結(jié)構(gòu)膽堿能纖維的變化，初步探討在CNS退變和損傷過程中雌激素、植物雌激素和Nogo-A可能存在的關(guān)系，為研究雌激素和植物雌激素在CNS損傷過程中對中樞

4、神經(jīng)的保護作用的可能機制及臨床上應(yīng)用植物雌激素進行雌激素替代治療損傷的中樞神經(jīng)提供理論依據(jù)。方法：第一部分實驗：25只3月齡健康雌性SD大鼠隨機分為5組：①假手術(shù)(假OVX)組(生理鹽水50μl)、②去卵巢2周(OVX，2w)組(生理鹽水50μl)、③去卵巢4周(OVX，4w)組(生理鹽水50μl)、④苯甲酸雌二醇4周(OVX+E2，4w)組(50μg)、⑤金雀異黃酮4周(OVX+Gs，4w)組(250μg)。假手術(shù)組摘除卵巢周圍約1g

5、的脂肪組織，其余4組摘除雙側(cè)卵巢。術(shù)后第2天開始皮下注射給藥，隔日1次。分別于術(shù)后2周和4周觀察各組動物基底前腦和海馬Nogo-A陽性神經(jīng)元分布特征，并進行細(xì)胞計數(shù)。結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。第二部分實驗：30只3月齡健康雌性SD大鼠隨機分為6組：①假手術(shù)(假OF)組(生理鹽水50μl)、②去卵巢(OVX，2w)組(生理鹽水50μl)、③穹窿海馬傘切斷(FF)組(生理鹽水50μl)、④去卵巢+穹窿海馬傘切斷(OF)組(生理鹽水50μl)、⑤苯

6、甲酸雌二醇(OF+E2)組(50μg)、⑥金雀異黃酮(OF+Gs)組(250μg)。假手術(shù)組摘除卵巢周圍約1g的脂肪組織和去掉左側(cè)部分頂骨，去卵巢組摘除雙側(cè)卵巢，穹窿海馬傘切斷組切斷左側(cè)穹窿海馬傘，其余3組摘除雙側(cè)卵巢并切斷左側(cè)穹窿海馬傘。術(shù)后第2天開始皮下注射給藥，隔日1次。術(shù)后2周觀察各組動物海馬CA1區(qū)輻射層、DG分子層膽堿能纖維的變化情況以及基底前腦和海馬Nogo-A陽性神經(jīng)元分布特征，并進行細(xì)胞計數(shù)。結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析。

7、 結(jié)果：第一部分實驗：在去卵巢后的不同時問組，Nogo-A陽性神經(jīng)元在各亞區(qū)的分布均以CA2-3區(qū)為最高，其次為CA1區(qū)和hDB，再次為DG，MS為最低；去卵巢2周組在各亞區(qū)的Nogo-A陽性神經(jīng)元數(shù)與假手術(shù)組相比無明顯差異(p＞0.05)；去卵巢4周組Nogo-A陽性神經(jīng)元數(shù)目在CA1區(qū)、MS各組問無明顯改變，但在CA2-3區(qū)、DG和hDB較假手術(shù)組明顯增多(p＜0.05)；雌激素、植物雌激素4周組的Nogo-A陽性神經(jīng)元數(shù)較去卵巢

8、4周組明顯減少(p＜0.05)，而與假手術(shù)組相比無明顯差異(p＞0.05)；雌激素和植物雌激素組間無明顯差異(p＞0.05)。第二部分實驗：FF組和OF組的AchE陽性纖維較假手術(shù)組明顯減少(p＜0.05)；FF組和OF組間AchE陽性纖維無明顯差異(p＞0.05)；OVX(2w)組、雌激素和植物雌激素治療組的AchE陽性纖維與假手術(shù)組相比無明顯差異(p＞0.05)，但明顯多于FF組和OF組(p＜0.05)。各組Nogo-A陽性神經(jīng)元數(shù)

9、目在CA1區(qū)和DG無明顯改變；在CA2-3區(qū)，OVX(2w)組Nogo-A陽性神經(jīng)元數(shù)與假手術(shù)組相比無明顯差異(p＞0.05)，但與FF組、OF組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.05)；FF組和OF組Nogo-A陽性神經(jīng)元數(shù)較假手術(shù)組明顯增多(p＜0.05)；OF組和FF組間Nogo-A陽性神經(jīng)元數(shù)無明顯差異(p＞0.05)；雌激素、植物雌激素治療組的Nogo-A陽性神經(jīng)元數(shù)較FF組和OF組明顯減少(p＜0.05)，但與假手術(shù)組相比無明顯差異

10、(p＞0.05)。在基底前腦MS和hDB，OVX(2w)組Nogo-A陽性神經(jīng)元數(shù)與假手術(shù)組相比無明顯差異(p＞0.05)，但與FF組和OF組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.05)；FF組和OF組Nogo-A陽性神經(jīng)元數(shù)較假手術(shù)組明顯增多(p＜0.05)；OF組和FF組間Nogo-A陽性神經(jīng)元數(shù)無明顯差異(p＞0.05)；雌激素、植物雌激素治療組的Nogo-A陽性神經(jīng)元數(shù)雖較假手術(shù)組增多(p＜0.05)，但與FF組和OF組相比減少明顯(p＜0

11、.05)。在海馬和基底前腦各亞區(qū)，雌激素和植物雌激素組間無明顯差異(p＞0.05)。 結(jié)論：1.雌激素撤退可以引起海馬和基底前腦部分腦區(qū)神經(jīng)元Nogo-A表達升高。2.雌激素和植物雌激素可以下調(diào)去卵巢大鼠部分腦區(qū)神經(jīng)元Nogo-A表達的升高。3.雌激素、植物雌激素對隔海馬通路損傷后海馬結(jié)構(gòu)膽堿能纖維再生有促進作用。4.損傷隔海馬通路可以引起海馬和基底前腦部分腦區(qū)神經(jīng)元Nogo-A表達升高。5.雌激素和植物雌激素可以下調(diào)隔海馬通路