虎杖苷對(duì)急性髓系白血病細(xì)胞株THP-1增殖及凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　虎杖苷是我國(guó)傳統(tǒng)中藥虎杖中萃取而來(lái)，具有降低血脂、保護(hù)心肌細(xì)胞、抑制血小板聚集、改善微循環(huán)等作用，近年來(lái)亦有研究證明虎杖苷能抑制實(shí)體瘤的發(fā)展，但對(duì)其抗白血病研究較少，本研究主要有以下兩個(gè)研究目的：（1）觀察虎杖苷對(duì)急性髓系白血病細(xì)胞株THP-1增殖、凋亡的影響；（2）探討虎杖苷對(duì)THP-1抑制增殖及誘導(dǎo)凋亡可能的機(jī)制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)白血病細(xì)胞株THP-1，以不同濃度（0、10、20、40、60、

2、80、120、140、160μM）虎杖苷處理THP-1細(xì)胞24h、48h后，CCK-8檢測(cè)虎杖苷對(duì)細(xì)胞的藥物毒性作用，并繪制各作用條件下的細(xì)胞增殖抑制曲線(xiàn)；根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)步驟結(jié)果選取不同濃度（0、30、60、90μM）虎杖苷處理THP-1細(xì)胞24h，AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布，Westernblot檢測(cè)周期蛋白cyclinA、cyclinB、cyclinD1及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Ba

3、x表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：
　　1.虎杖苷對(duì)THP-1細(xì)胞增殖的影響
　　CCK-8結(jié)果提示，在0-160μM范圍內(nèi)虎杖苷作用24h、48h后可有效抑制THP-1細(xì)胞增殖，且隨濃度增加或時(shí)間延長(zhǎng)，其抑制率增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F時(shí)間=187.014，F(xiàn)濃度=726.164，F(xiàn)交互=201.568，P均＜0.001）。
　　2.虎杖苷誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞周期變化的觀察
　　經(jīng)虎杖苷處理24h的THP-1細(xì)

4、胞周期發(fā)生了阻滯，主要是停留在S期，并且隨著藥物濃度的增加（0-30-60-90μM），處于S期的THP-1細(xì)胞比值增大，分別為（26.21±6.02）％、（27.55±5.46）%、（34.91±7.17）%、（44.95±8.97）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=12.831，P＜0.001）；處于G0/G1期細(xì)胞的比值減小，分別為（65.2±7.45）%、（62.78±7.69）%、（55.87±7.16）%、（45.82±6.32）%

5、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=9.213，P=0.001)；而處于G0/G1期細(xì)胞的比值分別為（8.59±2.71）%、（9.67±2.47）%、（9.12±2.84）%、（9.23±3.02）%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.209，P=0.888)。
　　3.虎杖苷誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞凋亡率的測(cè)定
　　經(jīng)虎杖苷處理24h的THP-1細(xì)胞發(fā)生凋亡現(xiàn)象，并且隨著藥物濃度的增加（0-30-60-90μM），早期凋亡細(xì)胞比例隨之增加，分別為

6、（1.43±0.60）%、（4.67±0.56）%、（8.73±1.15）%、（19.71±4.76）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=30.797，P<0.001)。
　　4.虎杖苷對(duì)THP-1作用機(jī)制探索
　　1）虎杖苷對(duì)周期蛋白cyclinA、cyclinB和cyclinD1的影響Westernblot檢測(cè)周期相關(guān)蛋白的結(jié)果表明，隨著虎杖苷作用濃度的增高（0-30-60-90μM），THP-1細(xì)胞cyclinD1的表達(dá)量下降，

7、分別為（0.521±0.106）、（0.489±0.107）、（0.392±0.081）、（0.287±0.065），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=12.412，P=0.008)；cyclinA的表達(dá)量增加，分別為（0.378±0.086）、（0.426±0.091）、（0.579±0.121）、（0.741±0.123），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=20.808，P=0.002)；但cyclinB的表達(dá)量分別為（0.412±0.092）、（0.43

8、7±0.098）、（0.429±0.107）、（0.441±0.089），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.122，P=0.736)。
　　2）虎杖苷對(duì)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax的影響Westernblot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的結(jié)果表明，隨著虎杖苷作用濃度的增高（0-30-60-90μM），THP-1細(xì)胞Bcl-2的表達(dá)量減少，分別為（1.021±0.329）、（0.995±0.207）、（0.726±0.158）、（0.482±0.12

9、1），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=16.210，P=0.004)；Bax的表達(dá)量增加，分別為（0.395±0.089）、（0.418±0.107）、（0.651±0.137）、（0.823±0.221），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=12.547，P=0.008)。
　　結(jié)論：
　　1.虎杖苷能夠有效抑制THP-1細(xì)胞增殖，并呈時(shí)間及劑量-效應(yīng)關(guān)系；
　　2.虎杖苷可促進(jìn)THP-1細(xì)胞早期凋亡，并將THP-1細(xì)胞阻滯在S期，呈劑量依