人肝癌細(xì)胞總RNA電轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞的抗腫瘤研究.pdf

1、目的：探討人肝癌細(xì)胞總RNA電轉(zhuǎn)染人樹突狀細(xì)胞(DC)后能否誘導(dǎo)出特異性的效應(yīng)T細(xì)胞；觀察電轉(zhuǎn)染前后和成熟前后的樹突狀細(xì)胞表面形態(tài)學(xué)及蛋白表達(dá)變化；分析人肝癌細(xì)胞總RNA電轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞并誘導(dǎo)特異性的效應(yīng)T細(xì)胞抗人肝癌的特異性，為樹突狀細(xì)胞抗腫瘤的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。 方法：通過密度梯度離心法分離人外周血的單核細(xì)胞，采用細(xì)胞因子體外培養(yǎng)誘導(dǎo)其分化為未成熟樹突狀細(xì)胞(imDC)和成熟樹突狀細(xì)胞(mDC)。采用Wright-Gim

2、sa染色、免疫細(xì)胞化學(xué)、酶細(xì)胞化學(xué)檢測、光學(xué)顯微鏡、倒置顯微鏡、透射電子顯微鏡和掃描電子顯微鏡觀察單核細(xì)胞、未成熟樹突狀細(xì)胞、成熟樹突狀細(xì)胞形態(tài)及其表面標(biāo)志等。 培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞株Bel-7402，采用Wright-Gimsa染色、倒置顯微鏡、免疫細(xì)胞化學(xué)觀察人肝癌細(xì)胞形態(tài)及其表面標(biāo)志。Trizol一步法提取人肝癌細(xì)胞總RNA。檢測其完整性和純度。 通過電轉(zhuǎn)染法將人肝癌細(xì)胞總RNA導(dǎo)入未成熟樹突狀細(xì)胞內(nèi)；觀測電轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)

3、胞的轉(zhuǎn)染率及臺盼藍(lán)檢測電轉(zhuǎn)24h后細(xì)胞的死亡率；電轉(zhuǎn)染后的未成熟樹突狀細(xì)胞形態(tài)及其表面標(biāo)志并與電轉(zhuǎn)染前作比較。 從人外周血分離出T細(xì)胞，采用Wright-Gimsa染色、免疫細(xì)胞化學(xué)、酶細(xì)胞化學(xué)檢測細(xì)胞形態(tài)及其表面標(biāo)志等。通過T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，獲取人肝癌細(xì)胞RNA電轉(zhuǎn)染的樹突狀細(xì)胞所激活的特異性效應(yīng)T細(xì)胞，用MTT法測定T細(xì)胞增殖率。 通過效應(yīng)T細(xì)胞分別與人肝癌細(xì)胞和人骨肉瘤細(xì)胞(MG-63)混合培養(yǎng)，用