樹突狀細胞與CIK細胞抗腫瘤活性研究.pdf

1、該實驗通過常規(guī)分離人外周血單個核細胞,應用相應細胞因子體外誘導分化出DC和CIK細胞,并將DC和CIK細胞共培養(yǎng),觀察DC與同源CIK細胞共培養(yǎng)后培養(yǎng)物的細胞形態(tài)學、體外增殖活性、細胞表型和細胞毒活性變化,對CIK和DC-CIK共培養(yǎng)細胞抗瘤機制做進一步研究,對過繼免疫療法進行新的探索.第一部分,樹突狀細胞與CIK細胞共培養(yǎng)后體外增殖和殺瘤活性研究.目的:觀察樹突狀細胞與同源CIK細胞共培養(yǎng)后培養(yǎng)物的細胞形態(tài)學、表型、增殖活性變化,及D

2、C對CIK細胞細胞毒活性的影響.方法:提取健康供血者的PBMC,應用相應的細胞因子體外誘導出DC與CIK細胞;用A549肺腺癌細胞裂解液抗原沖擊DC,經抗原致敏與未經抗原致敏的DC分別和CIK細胞共培養(yǎng),動態(tài)觀察CIK細胞和DC-CIK培養(yǎng)物的增殖活性;在流式細胞儀上做動態(tài)培養(yǎng)物的表型分析;定量檢測細胞培養(yǎng)上清中的IFN-γ和IL-12的分泌水平;并用MTT法檢測CIK細胞、DC-CIK共培養(yǎng)細胞和抗原致敏的DC-CIK共培養(yǎng)細胞殺傷A

3、549肺腺癌細胞和BEL-7404肝癌細胞的活性.第二部分,樹突狀細胞與CIK細胞治療結腸癌血源性肺轉移的實驗研究.目的:觀察樹突狀細胞與同源CIK細胞共培養(yǎng)后治療結腸癌血源性肺轉移的可能性.方法:提取健康供血者的PBMC,應用相應的細胞因子體外誘導出DC與CIK細胞;用Lovo結腸癌細胞裂解液抗原沖擊DC,經抗原致敏與未經抗原致敏的DC分別和CIK細胞共培養(yǎng).將Lovo結腸癌細胞經尾靜脈注射給Balb/c裸鼠建立結腸癌血源性肺轉移模型

4、,應用CIK細胞、DC-CIK細胞和Lovo結腸癌細胞裂解液致敏的DC-CIK細胞進行免疫治療.除對照組外,分別于接種腫瘤的第3,7,10天尾靜脈輸入各組效應細胞,觀察裸鼠生存時間.Trizol法抽取組織或細胞中的總RNA,采用逆轉錄多聚酶鏈反應(RT-PCR)法測定Lovo結腸癌細胞、裸鼠正常組織和癌組織CEA基因的表達.第三部分,化療后樹突狀細胞與CIK細胞抗腫瘤研究.目的:觀察樹突狀細胞與同源CIK細胞共培養(yǎng)后培養(yǎng)物的表型、體外增