二苯乙烯苷對腦缺血再灌注大鼠大腦皮質NGF、PKAc及GAP-43蛋白表達的影響.pdf

1、背景與目的：腦缺血損傷后細胞的存活、增殖受多種信號途徑的調節(jié)。研究顯示，外源性神經生長因子（NGF）能夠上調cAMP的表達，激活PKA通路，使軸突生長相關蛋白43（GAP-43）的表達增加，促進軸突再生，起到神經保護作用。近年來研究發(fā)現中藥何首烏（polygonum multiflorum thunb）及其活性成分二苯乙烯苷（tetrahydroxystilbene glucoside，簡稱TSG）對腦缺血損傷具有保護作用，但其作用機制

2、與量效關系仍不十分明確。另外，有研究顯示二苯乙烯苷能夠提高內源性神經生長因子的表達，從而提高小鼠的學習記憶能力，起到腦保護作用。本研究將在大鼠腦缺血－再灌注損傷模型上，以二苯乙烯苷（兩組劑量）為干預手段，通過動態(tài)觀察大鼠局灶性腦缺血再灌注后缺血半暗帶NGF、PKAc與GAP-43蛋白的表達及小、大兩組TSG劑量對三者的影響，結合病理、神經功能和細胞凋亡方面，探討該藥在腦缺血保護作用中的可能機制及量效關系，以期為腦缺血的防治以及新藥的開發(fā)

3、提供實驗基礎。 方法：200～300g健康雄性SD大鼠，隨機分為4組：對照組（n＝24），模型組（n＝24），小劑量TSG組（n=24），大劑量TSG組（n＝24）。小劑量為60mg/kg/d、大劑量為120mg/kg/d兩種劑量灌胃，給藥體積5ml/kg/d，模型組以等量的生理鹽水灌胃，第七天灌胃后1h行Longa線栓法制備大腦中動脈栓塞模型（MCAO）。按Longa的5級標準評分法評價神經功能缺損。再灌注6h、24 h、48

4、 h、7d共4個時間點處死大鼠。分別采用HE染色觀察缺血周邊區(qū)病理組織學變化；原位末端脫氧核苷酸轉移酶標記法（TUNEL）檢測神經細胞凋亡；免疫組化法檢測NGF、PKAc及GAP-43蛋白表達變化。 結果： 1、兩種劑量TSG組神經功能缺損程度除6h時間點外其余各時間點均低于模型組。 2、模型組與兩種劑量TSG組再灌注24 h的HE染色均顯示出典型的壞死灶和神經元丟失。 3、對照組檢測到少量凋亡細胞；模型

5、組與TSG組再灌注6h后凋亡細胞開始增多，24 h達高峰，48 h明顯下降，7d僅有少量表達。與模型組對比，除7d外，其余各時間點兩種劑量TSG組凋亡細胞數減少；兩種劑量TSG組間無明顯差異。 4、對照組各時間點檢測到少量NGF、PKAc及GAP-43蛋白的表達。模型組與TSG組NGF、PKAc、GAP-43蛋白的表達變化基本一致，其中前兩者再灌注6h后出現陽性表達，24 h達到高峰，48 h表達下降，7天少量表達；而GAP-4