轉(zhuǎn)錄因子FEZF2在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞發(fā)育中的表達和功能研究.pdf

1、目的:哺乳動物的視網(wǎng)膜包含七種細胞（視錐細胞，視桿細胞，水平細胞，雙極細胞，無長突細胞，節(jié)細胞和Müller細胞）。它們共同起源視網(wǎng)膜神經(jīng)祖細胞，但是它們的產(chǎn)生在時間及空間上卻是有著嚴格的順序。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞是第一個產(chǎn)生的細胞類型，但是其形成的機制目前尚不明了。轉(zhuǎn)錄因子FEZF2在大腦投射神經(jīng)元發(fā)育過程中具有著命運決定和軸突導向作用，但是在視網(wǎng)膜中還未有研究。本課題的研究目的是確定轉(zhuǎn)錄因子FEZF2在視網(wǎng)膜節(jié)細胞中的表達和功能。

2、>　　 方法:我們用原位雜交技術來檢測Fezf2在視網(wǎng)膜的表達情況，用免疫熒光技術來檢測其它視網(wǎng)膜標記性基因的表達情況。對于Fezf2的功能實驗，我們采用基因胚胎電轉(zhuǎn)的方法在E13.5的視網(wǎng)膜中來上調(diào)和下調(diào)Fezf2。并用流式細胞術分選出轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細胞，通過定量PCR檢測候選基因的表達。
　　 結果:我們觀察到Fzf2表達在E16.5的視網(wǎng)膜前體細胞層中，而在節(jié)細胞層沒有檢測到陽性信號。而Fezf2的反鏈基因和Fezf2的直接

3、抑制基因——Tbr1則都表達在E16.5及以后的節(jié)細胞層。當我們在視網(wǎng)膜上過表達Fezf2后，發(fā)現(xiàn)部分轉(zhuǎn)染了Fzef2的節(jié)細胞不能遷移至節(jié)細胞層，這提示Fezf2的下調(diào)可能是節(jié)細胞遷移所必需的。另外，在過表達Fezf2的節(jié)細胞中幾乎沒有發(fā)現(xiàn)ISLET1，MATH5和DLX1/2的表達，且過表達Fezf2的節(jié)細胞的軸突也不能向上丘發(fā)出投射。與之相反，我們抑制了Fezf2的表達后發(fā)現(xiàn)，除了BRN3B的表達受到抑制之外，其它的節(jié)細胞標記性基因