Brn-3a標(biāo)記大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　對比Brn-3a與Thy-1.1標(biāo)記大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)的特點(diǎn)及計(jì)數(shù)差異，評估Brn-3a是否可作為一種可靠的內(nèi)源性標(biāo)記物，標(biāo)記并計(jì)數(shù)大鼠RGCs。
　　方法：20只SD大鼠，隨機(jī)選取大鼠一眼為Thy-1.1組，另一眼作為Brn-3a組,過量麻醉處死，行3點(diǎn)鐘位縫線標(biāo)記,立即摘除眼球，浸泡于4％多聚甲醛的固定液中。48h后沿角鞏膜緣切除眼前節(jié)，剝離晶狀體，余下部分逐節(jié)脫水、透明、石蠟包埋，于視乳頭顳側(cè)

2、旁開1mm，做4μm切片，烘干備用，做視網(wǎng)膜石蠟切片，常規(guī)蘇木素-伊紅染色鏡下觀察R GC s的形態(tài)，運(yùn)用免疫組織化學(xué)法檢測Brn-3a與Thy-1.1的表達(dá)情況，每只眼球取1張切片，在每張待測視網(wǎng)膜切片上，以視網(wǎng)膜后極部中點(diǎn)為起點(diǎn)，至近角膜緣視網(wǎng)膜止點(diǎn)處，將視網(wǎng)膜分為三等份，即中央?yún)^(qū)、中間區(qū)及周邊區(qū)，每個區(qū)域視網(wǎng)膜隨機(jī)取5個高倍視野，分別計(jì)數(shù)Thy-1.1、Brn-3a陽性細(xì)胞均數(shù)。
　　結(jié)果：光鏡下正常大鼠的視網(wǎng)膜從內(nèi)向外依次

3、為神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層(GCL)、內(nèi)核層(INL)、外核層(ONL)。GCL的細(xì)胞呈單層排列，較為整齊，胞核清楚數(shù)目相對較少，INL和ONL呈多層排列，且細(xì)胞排列緊密，數(shù)目相對較多。兩種標(biāo)記物染色都僅僅存在于視網(wǎng)膜的GCL，但在大鼠RGCs中分布呈明顯差異：Brn-3a主要在胞核中著色，Thy-1.1主要在胞漿中著色；運(yùn)用此兩種標(biāo)記物標(biāo)記計(jì)數(shù)RGCs,中央?yún)^(qū)Thy-1.1組(n=20)和Brn-3a組(n=20)分別是29.75±2.02（個/

4、高倍視野）和29.46±1.25（個/高倍視野），中間區(qū)Thy-1.1組(n=20)和Brn-3a組(n=20)分別是24.72±1.10（個/高倍視野）和24.43±1.66（個/高倍視野），周邊區(qū)Thy-1.1組(n=20)和Brn-3a組(n=20)分別是21.79±1.25（個/高倍視野）和21.84±1.37（個/高倍視野）,各個相同區(qū)域內(nèi)Thy-1.1和Brn-3a陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05)。Thy