MiR-23a對(duì)人乳腺癌細(xì)胞自噬的影響.pdf

1、目的：研究參與人乳腺癌細(xì)胞自噬調(diào)控的miRNAs。
　　方法：
　　1.課題組前期通過(guò)western-blot方法篩選出microRNAs（miRNAs）參與調(diào)控乳腺癌細(xì)胞自噬，本課題從中選擇四個(gè)miRNAs并通過(guò)western-blot方法檢測(cè)LC3蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
　　2.選擇兩株乳腺癌細(xì)胞T47D和MCF-7分別轉(zhuǎn)染miR-23a模擬物（miR-23a mimic）和miR-23a抑制物（miR-2

2、3a ASO）后應(yīng)用western-blot、細(xì)胞免疫熒光和細(xì)胞電鏡方法，驗(yàn)證miR-23a對(duì)人乳腺癌細(xì)胞自噬的影響。
　　3.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)miR-23a對(duì)人乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響。
　　4.應(yīng)用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)miR-23a潛在的靶基因。
　　結(jié)果：
　　1. Western-blot結(jié)果顯示，與陰性對(duì)照組相比較，乳腺癌MCF-7細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-24 mimic，miR-7 mimic,miR-23a m

3、imic,miR-513a-5p mimic后miR-23a明顯增加LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。
　　2.體外自噬實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　(1)Western-blot結(jié)果顯示，與陰性對(duì)照組相比較，T47D細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-23a mimic后明顯下調(diào) p62蛋白的表達(dá)，而增加 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值，MCF-7細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-23a ASO后則明顯上調(diào)p62蛋白的表達(dá)，而降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。
　　(2)細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示

4、，細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-23a mimic后GFP-LC3點(diǎn)狀聚集數(shù)目顯著增多，即自噬陽(yáng)性細(xì)胞達(dá)到22.6％（P﹤0.05），陰性對(duì)照組自噬陽(yáng)性細(xì)胞為4%。細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-23a ASO后GFP-LC3點(diǎn)狀聚集數(shù)目顯著減少，即自噬陽(yáng)性細(xì)胞降低至3%（P<0.05），陰性對(duì)照組自噬陽(yáng)性細(xì)胞為10%。
　　(3)細(xì)胞電鏡結(jié)果顯示，T47D細(xì)胞轉(zhuǎn)染了miR-23a mimic后，自噬小體明顯多于對(duì)照組。
　　3.流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示，